鹽酸克侖特羅（瘦肉）檢測試劑盒/（瘦肉）檢測試劑盒  型號:DP-SRJ

   本試劑盒采用競爭酶標免疫法定量測定尿,、肌肉,，肝臟及飼料中的克倫特羅及其他β興奮劑,。試劑盒中包括了96個試驗孔包括標準試驗及所有檢測用的試劑。如果行定量分析,，有微孔板酶標儀,。
概要
     克侖特羅（clenbuterol，CLE）是種腎上腺受體激動劑即神經興奮劑,，在臨床上用于治療支氣管哮喘,、慢性支氣管炎和肺氣腫等疾病，因此藥可以提瘦肉率,，減少脂肪沉積和促動物生長,，被些畜牧養(yǎng)殖企業(yè)作為養(yǎng)殖促劑非法使用。其殘留量可導致人體肌肉震顫,、心悸,、神經過敏、頭痛,、目眩,、惡心、嘔吐,、發(fā)燒,、戰(zhàn)栗等癥狀，對消費者的健康有危害?，F(xiàn)已被明令禁止用于養(yǎng)殖業(yè),。HPLC或GC-MS直用作檢測β興奮劑的方法，但是其前處理步驟費用昂貴,。酶聯(lián)免疫檢測試劑盒則可經濟,、快速地檢測尿，肌肉,，肝臟及飼料中的CLE,。
測定原理
     測定的基礎是抗原抗體反應。微孔板包被有針對CLE的兔抗體,。經過洗滌步驟后,，加入CLE酶標記物，標準或樣品溶液,。CLE與CLE-酶標記物競爭抗體，沒有連接的CLE-酶標記物在洗滌步驟中被除去。將酶反應底物（過氧化尿素）和顯色劑（四甲基聯(lián)苯胺）加入到孔中并且孵育,。結合的酶標記物將無色的顯色劑轉化為藍色的產物,。加入反應停止液后使顏色由藍轉變?yōu)辄S色。在450nm處測量,，吸收光強度與樣品中的CLE濃度成反比,。
提供的試劑（2-8℃保存）切勿冷凍
每個盒中的試劑足夠行96個測量（包括標準分析孔），盒中的材料如下：
       1×96孔板（12條×8孔）包被有兔IgG抗體    
       6×標準液,，       （2ml）為分別含0, 0.1, 0.3, 0.9, 2.7, 8.1ppb 的CLE水溶液
       1×CLE過氧化物酶標記物濃縮溶液     
       1×酶反應底物 （6ml）,；含有過氧化尿素
       1×顯色劑         （6ml）;四甲基聯(lián)苯胺
       1×反應停止液 （7ml）；1M 硫酸
       1×PBS        （10ml）, 用于稀釋CLE-過氧化物酶標記物濃縮溶液
       1×PBST濃縮液（40ml）,，加800ml蒸餾水稀釋,，洗板用
樣品處理
    樣品處理方法1
      組織、肉樣（純肉）,、內臟樣品的處理方法:
１．稱2克勻漿過的樣品加入2 mL溶液１（無色無味）,，攪拌或震蕩樣品，使之混合均勻,。
2. 加入6 ml溶液2（淡黃色,具刺激性氣味）,，推薦用干凈的衛(wèi)生筷或竹簽攪拌樣品5分鐘,；或振蕩15分鐘,，使其均勻分布于溶液中。
3．3000g離心10分鐘,。
4.  取3ml上清液于干凈平皿中,60℃恒溫箱蒸干（30分鐘左右）；也可在試管中直接水浴加熱蒸干,。
5．殘留物用1ml 溶液2 （無色無味） 沖洗溶解。
6．3000g離心10分鐘,。
7．取清亮中間分50ul直接加樣, ELISA行分析。
注：如果不慎將溶液弄到皮膚上,，請立即用７５％的用酒棉花擦拭,，并用清水沖洗。切勿飲用及濺入眼睛,。
 
     樣品處理方法2                  （更快速）
1,、稱2克勻漿過的樣品加入2 mL溶液１（無色無味）,，攪拌或震蕩樣品，使之混合均勻,。
2,、加入4mL溶液2 （淡黃色,具刺激性氣味），強烈振蕩,，肉樣約2分鐘,，組織約6分鐘。
3,、3000g離心5分鐘,。
4、取1 ml上清液于干凈平皿中,，70℃~80℃恒溫箱蒸干（約需5分鐘左右）,。或用電吹風,，只需3分鐘,。
5、殘留物用0.5 ml 溶液3 （無色無味） 沖洗,，將底白色殘留物洗入溶液。
6,、取洗脫液50ul作檢測用,。
 
酶標免疫分析程序
1. 測定之前注意事項
   a）  使用之前將所有試劑回升至室溫20-25℃
   b）  使用之后立即將所有試劑放回2-8℃
   c）  在使用中不要讓微孔干燥
   d）  在ELA分析中的重復性，很大程度上取決于洗板的*性,，仔細按照推薦的洗板順序操作是ELA測定程序中的要點
   e）  在所有恒溫孵育過程中,，避免光線照射，用蓋子蓋住微孔板
2.酶標記物與微孔板條
   a） CLE- 酶標記物 提供的CLE- 酶標記物為濃縮液,。由于稀釋的酶標記物穩(wěn)定性不好,，所以只稀釋實際需用量的酶標記物1：14稀釋（1μl酶標液加14μlPBS）。在吸取濃縮液之前,，要仔細地振搖,，剩余的仍放置2-8℃保存。
   b）微孔板條  取出需用數(shù)量的微孔板及框架,，將不用的微孔板用膠帶封好,，放原袋中重新密封，4℃或-20℃保存,，謹防受潮,。
3. 標準液    提供的CLE標準液濃度為0, 0.1, 0.3, 0.9, 2.7, 8.1ppb（ng/ml）
4. 測定程序（室溫25℃條件下操作）
   a） 剪開鋁箔袋，將足夠標準和樣品所用數(shù)量的孔條插入微孔架,，標準和樣品做兩個平行實驗,，記錄下標準和樣品的位置。加入20μl的標準液或處理好的樣品到各自的微孔中。如果微孔板條次實驗用不,，放回原鋁箔袋中封緊,，再套個塑料自封袋夾緊后4℃或-20℃保存，切忌受潮,。
   b） 加入100μl稀釋的酶標記物到微孔底,，25℃孵育30分鐘（推薦使用恒溫箱）。
   c） 倒出孔中的液體,，將微孔架倒置在吸水紙上拍打（每行拍打3次）以保證除去孔中的液體,，用250μl PBST充入孔中，再次倒掉微孔中液體,，再重復操作兩次,。每次洗板應加入洗液后等2分鐘再倒掉。推薦使用洗瓶洗板,，這樣可加快速度,，避免板條間的孵育時間不*而產生OD值的差異。
   d） 反應底物與顯色試劑以1：1混合后加入100μl到微孔中,，充分混合并在25℃暗處孵育15分鐘,。
   e） 加入50μl反應停止液到微孔中，混合好在450nm 處測量吸光度值,，在加入停止液后10分鐘內讀取光度值,。
結果
     所獲得的標準和樣品吸光度值的平均值除以*個標準（0標準）的吸光度值再乘以100，因此0標準等于并且以百分比的形式給出吸光度值,。
 
               標準的吸光度值（或樣品）
              ----------------------- ×100 =  %吸光度值
                    0標準的吸光度值
 
計算的標準值繪成為個對應CLE濃度（ng/g,或ng/ml）的半對數(shù)坐標系統(tǒng)曲線圖,，校正曲線在0.2-2ng/g（ppb）范圍內應當成為線性。相對應每個樣品的濃度（ng/g, 或ng/ml）可以從校正曲線上讀出,。
靈敏度
     克倫特羅測定試劑盒的平均檢測下限約為0.1ng/g（0.1ppb）,。
特異性
   與克倫特羅類似物的交叉反應：
      克倫特羅（Clenbuterol）                                           
      溴布特羅（brombuterol）            110%
      塞布特羅（cimbuterol ）              40%                           
      馬噴特羅（mapenterol）              17%
      馬布特羅（mabuterol）               16%                                    
      沙丁胺醇（salbutamol）               9%
      妥布特羅（tulobuterol）               2%                                                                      特布他林（terbutalin）                 2%
      萊克多巴胺                             <1%                      
     異丙腎上腺素（Isoproterenol）       <1%
      腎上腺素（Adrenalin ）                <1%                                  
     去甲腎上腺素（Noradrenalin）         <1%
 
回收率
       回收率為90%±15%