分光光度法是在特定波長處或一定波長范圍內(nèi)光的吸收度,，對該物質(zhì)進行定性或定量分析,。常用的波長范圍為:(1)200~380nm的紫外光區(qū),，(2)380~780nm的可見光區(qū),，(3)2.5~25μm(按波數(shù)計為4000cm<-1>~400cm<-1>)的紅外光區(qū),。所用儀器為紫外分光光度計,、可見光分光光度計(或比色計)、紅外分光光度計或原子吸收分光光度計,。
分光光度計在選擇適合自己的產(chǎn)品時,，要注意哪些因素
光源和檢測方法
分光光度計的光譜也是需要考慮的一個重要因素。實驗室研究人員希望省錢購入專門儀器定量核酸,、蛋白或者細菌的生長情況,。
紫外分光光度計一般覆蓋190nm和380nm波長，通常利用氘燈照明,。一些特殊的儀器可以提供滿足光子學(xué)和半導(dǎo)體研究需要的光譜范圍,。
一些儀器具有多種光源供選擇：紫外光、可見光和甚至紅外光(780 nm 至3,000 nm)。鎢燈和鹵素?zé)粢话阒桓采w可見光部分(大約380 nm 到800 nm),。而氙燈則可以覆蓋紫外光和可見光區(qū)域,。
分光光度計的帶寬很大程度上依賴于單色儀的狹縫的寬度?？梢酝渡涑鰧嶒灳_要求的光譜,。一種嚴(yán)格帶寬使得儀器能對復(fù)雜的混合物進行高分辨率的吸光測量?？勺兊膯紊珒x的狹縫寬度能使一臺分光光度計滿足多種實驗需要,。
為了測量吸光值，分光光度計制造商通常使用光電倍增管和光敏二極管,。PMTs提供快速的反應(yīng)時間和良好的靈敏度,，并且可以在紫外光譜調(diào)節(jié)至特定的范圍。但一些制造商依賴于光敏二極管的動態(tài)范圍在數(shù)秒內(nèi)行使所有的光譜測量,。
光學(xué)構(gòu)造
一般來說,，紫外光分光光度計分為單光束和雙光束兩類。顧名思義,，單光束型主要是依賴單束光進行測量,。一束給定波長的光通過對照物，然后再通過實際樣品溶液,，就能得到吸光結(jié)果,。
雙光束型則是通過一個斬光輪將一束光分成兩束，分別測量對照樣品和實際樣品,?？梢宰钚』馄?lamp drift)和減少測量時間。一些雙光型光度計不利用斬光輪,，而是利用一種光束分光器來代替,，將一束光分成兩束平行的光然后同時測量對照樣品和目的樣品。因為增加了測量的速度,，所以雙光束分光光度計在測量一些溶液隨時間動態(tài)變化的研究中大有用處,。
樣品類型
在大部分的樣品類型中，分光光度計可接受樣品孔,、小玻璃管cuvette,、吸漿管和微孔板。微孔板主要是滿足高通量的需要和大規(guī)模的實驗室需求,。但盡管對于小實驗室來說,，制造商仍然提供了多種容器轉(zhuǎn)換器來滿足通量的要求和減少實驗時間。
用小試管cuvette裝樣品容量一般從1 μl-5ml,，并且一些儀器裝備了各種樣品固定物來滿足各種改變需要,。體現(xiàn)了柔韌性。
數(shù)據(jù)管理
大部分單機型的分光光度計包含了驅(qū)動儀器運行和管理數(shù)據(jù)的軟件,。高性能的儀器,，通常與PC機一起聯(lián)用，需要從制造商提供額外的軟件,。同時用戶也可以選擇升級軟件以滿足他們的需要,。
