分光光度法是在特定波長處或一定波長范圍內(nèi)光的吸收度,，對(duì)該物質(zhì)進(jìn)行定性或定量分析,。常用的波長范圍為:(1)200~380nm的紫外光區(qū),，(2)380~780nm的可見光區(qū),，(3)2.5~25μm(按波數(shù)計(jì)為4000cm<-1>~400cm<-1>)的紅外光區(qū),。所用儀器為紫外分光光度計(jì),、可見光分光光度計(jì)(或比色計(jì)),、紅外分光光度計(jì)或原子吸收分光光度計(jì)。
分光光度計(jì)在選擇適合自己的產(chǎn)品時(shí),，要注意哪些因素
光源和檢測方法
分光光度計(jì)的光譜也是需要考慮的一個(gè)重要因素,。實(shí)驗(yàn)室研究人員希望省錢購入專門儀器定量核酸、蛋白或者細(xì)菌的生長情況,。
紫外分光光度計(jì)一般覆蓋190nm和380nm波長,，通常利用氘燈照明。一些特殊的儀器可以提供滿足光子學(xué)和半導(dǎo)體研究需要的光譜范圍,。
一些儀器具有多種光源供選擇：紫外光,、可見光和甚至紅外光(780 nm 至3,000 nm)。鎢燈和鹵素?zé)粢话阒桓采w可見光部分(大約380 nm 到800 nm),。而氙燈則可以覆蓋紫外光和可見光區(qū)域,。
分光光度計(jì)的帶寬很大程度上依賴于單色儀的狹縫的寬度?？梢酝渡涑鰧?shí)驗(yàn)精確要求的光譜,。一種嚴(yán)格帶寬使得儀器能對(duì)復(fù)雜的混合物進(jìn)行高分辨率的吸光測量。可變的單色儀的狹縫寬度能使一臺(tái)分光光度計(jì)滿足多種實(shí)驗(yàn)需要,。
為了測量吸光值,，分光光度計(jì)制造商通常使用光電倍增管和光敏二極管。PMTs提供快速的反應(yīng)時(shí)間和良好的靈敏度,，并且可以在紫外光譜調(diào)節(jié)至特定的范圍,。但一些制造商依賴于光敏二極管的動(dòng)態(tài)范圍在數(shù)秒內(nèi)行使所有的光譜測量。
光學(xué)構(gòu)造
一般來說,，紫外光分光光度計(jì)分為單光束和雙光束兩類,。顧名思義，單光束型主要是依賴單束光進(jìn)行測量,。一束給定波長的光通過對(duì)照物,，然后再通過實(shí)際樣品溶液，就能得到吸光結(jié)果,。
雙光束型則是通過一個(gè)斬光輪將一束光分成兩束,，分別測量對(duì)照樣品和實(shí)際樣品?？梢宰钚』馄?lamp drift)和減少測量時(shí)間,。一些雙光型光度計(jì)不利用斬光輪，而是利用一種光束分光器來代替,，將一束光分成兩束平行的光然后同時(shí)測量對(duì)照樣品和目的樣品,。因?yàn)樵黾恿藴y量的速度，所以雙光束分光光度計(jì)在測量一些溶液隨時(shí)間動(dòng)態(tài)變化的研究中大有用處,。
樣品類型
在大部分的樣品類型中,，分光光度計(jì)可接受樣品孔、小玻璃管cuvette,、吸漿管和微孔板,。微孔板主要是滿足高通量的需要和大規(guī)模的實(shí)驗(yàn)室需求。但盡管對(duì)于小實(shí)驗(yàn)室來說,，制造商仍然提供了多種容器轉(zhuǎn)換器來滿足通量的要求和減少實(shí)驗(yàn)時(shí)間,。
用小試管cuvette裝樣品容量一般從1 μl-5ml，并且一些儀器裝備了各種樣品固定物來滿足各種改變需要,。體現(xiàn)了柔韌性,。
數(shù)據(jù)管理
大部分單機(jī)型的分光光度計(jì)包含了驅(qū)動(dòng)儀器運(yùn)行和管理數(shù)據(jù)的軟件。高性能的儀器,，通常與PC機(jī)一起聯(lián)用,，需要從制造商提供額外的軟件。同時(shí)用戶也可以選擇升級(jí)軟件以滿足他們的需要,。
