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中級(jí)會(huì)員 | 第15年

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色譜柱的死體積是什么,,怎么計(jì)算

時(shí)間:2021/4/8閱讀:9433
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   色譜是一種分離分析手段,分離是核心,,因此擔(dān)負(fù)分離作用的色譜柱是色譜系統(tǒng)的心臟,。對(duì)色譜柱的要求是柱效高、選擇性好,,分析速度快等,。市售的用于HPLC的各種微粒填料如多孔硅膠以及以硅膠為基質(zhì)的鍵合相、氧化鋁,、有機(jī)聚合物微球(包括離子交換樹脂),、多孔碳等,其粒度一般為3,5,7,10μm等,,柱效理論值可達(dá)5~16萬(wàn)/米,。對(duì)于一般的分析只需5000塔板數(shù)的柱效。

 


   死體積狹義上指的是色譜柱中未被固定相占據(jù)的空隙體積,,即色譜柱內(nèi)流動(dòng)相的體積,。廣義上的死體積是指進(jìn)樣位置(進(jìn)樣口)到檢測(cè)位置(檢測(cè)器流通池)這一段的體積(PS:除去色譜柱中填料體積),,一旦色譜柱連接,這段體積是不變的(死的),。

   對(duì)于HPLC來(lái)說,,該如何計(jì)算死體積呢。 
   死體積(dead volume,V0)——由進(jìn)樣器進(jìn)樣口到檢測(cè)器流動(dòng)池未被固定相所占據(jù)的空間,。它包括4部分:進(jìn)樣器至色譜柱管路體積,、柱內(nèi)固定相顆粒間隙(被流動(dòng)相占據(jù),Vm),、柱出口管路體積,、檢測(cè)器流動(dòng)池體積。其中只有Vm參與色譜平衡過程,,其它3部分只起峰擴(kuò)展作用,。為防止峰擴(kuò)展,這3部分體積應(yīng)盡量減小,。

   死時(shí)間(dead time,t0)——不保留組分的保留時(shí)間,。即流動(dòng)相(溶劑)通過色譜柱的時(shí)間。

   測(cè)量系統(tǒng)死體積通常需要通過實(shí)驗(yàn)進(jìn)行測(cè)量,,常用方法是通過進(jìn)一針和色譜柱固定相沒有任何作用的特殊溶液(方法中會(huì)有規(guī)定,,例如:尿嘧啶,少量NaNO3或甲醇溶于流動(dòng)相得到的溶液,,也有直接用100%色譜純甲醇進(jìn)樣的情形)時(shí),,就會(huì)得到一個(gè)色譜峰,由此峰可以測(cè)得死時(shí)間(t0),,這就是t0的實(shí)測(cè)結(jié)果,。

   然后通過計(jì)算得到系統(tǒng)死體積:死體積(V0) = 死時(shí)間t0×流動(dòng)相的流速F。

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