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對(duì)于HPLC來(lái)說,,該如何計(jì)算死體積呢。
死體積(dead volume,V0)——由進(jìn)樣器進(jìn)樣口到檢測(cè)器流動(dòng)池未被固定相所占據(jù)的空間,。它包括4部分:進(jìn)樣器至色譜柱管路體積,、柱內(nèi)固定相顆粒間隙(被流動(dòng)相占據(jù),Vm),、柱出口管路體積,、檢測(cè)器流動(dòng)池體積。其中只有Vm參與色譜平衡過程,,其它3部分只起峰擴(kuò)展作用,。為防止峰擴(kuò)展,這3部分體積應(yīng)盡量減小,。
死時(shí)間(dead time,t0)——不保留組分的保留時(shí)間,。即流動(dòng)相(溶劑)通過色譜柱的時(shí)間。
測(cè)量系統(tǒng)死體積通常需要通過實(shí)驗(yàn)進(jìn)行測(cè)量,,常用方法是通過進(jìn)一針和色譜柱固定相沒有任何作用的特殊溶液(方法中會(huì)有規(guī)定,,例如:尿嘧啶,少量NaNO3或甲醇溶于流動(dòng)相得到的溶液,,也有直接用100%色譜純甲醇進(jìn)樣的情形)時(shí),,就會(huì)得到一個(gè)色譜峰,由此峰可以測(cè)得死時(shí)間(t0),,這就是t0的實(shí)測(cè)結(jié)果,。
然后通過計(jì)算得到系統(tǒng)死體積:死體積(V0) = 死時(shí)間t0×流動(dòng)相的流速F。
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