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中級(jí)會(huì)員 | 第15年

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MEM培養(yǎng)基的配制步驟

時(shí)間:2012-11-12閱讀:6972
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 MEM 1L 配方

1配置前準(zhǔn)備:配置培養(yǎng)基新制備的milli water,。調(diào)節(jié)pH值的酸堿溶液也應(yīng)該使用這種水配置,。制備培養(yǎng)基的器皿清洗干凈,并用milli water潤(rùn)洗兩次,。

2.溶解培養(yǎng)基:取5%終體積的milli water,,加入到1L玻璃杯中,將干粉培養(yǎng)基倒入燒杯,,水洗包裝袋內(nèi)面兩次,,倒入培養(yǎng)液中。磁力攪拌助溶,。

3.補(bǔ)加試劑:根據(jù)包裝袋說(shuō)明加入NaHCO3(2.2g),,HEPES(2.383,10mmol),、非必需氨基酸(可不加,10ml),。

4.加抗生素:一般抗生素終濃度——青霉素100U/ml,,鏈霉素100U/ml。1L加入10m儲(chǔ)備液,。

5.調(diào)pH值:加水到1000ml,,然后用HCL或者NaOH調(diào)節(jié)pH到7.2.

6.過(guò)濾除菌:采用0.22um濾膜。過(guò)濾后分裝于小瓶中(100或200ml),。過(guò)濾后pH值一般上升0.1-0.3.

7.加小牛血清:根據(jù)培養(yǎng)基配置的量將小牛血清分裝,,冷凍保存(-20度)。臨用前將加入小牛血清10%,。

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