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將親和反應(yīng)的高度選擇性,、低處理量特性與沉淀操作的大處理量,、地選擇性有機結(jié)合形成了親和沉淀技術(shù)。將配基與可溶性載體偶聯(lián)后形成載體-配基復(fù)合物,,該復(fù)合物與生物分子結(jié)合后在一定條件下可以沉淀出來,。
配基-載體復(fù)合物可以選擇性地與蛋白質(zhì)結(jié)合,溶液中的pH值,、離子強度及蛋白質(zhì)濃度等條件對親和結(jié)合的影響力并不大,,只有競爭性的配基會降低產(chǎn)物與原配基的親和結(jié)合力,甚至使親和結(jié)合發(fā)生逆轉(zhuǎn),。
引導(dǎo)產(chǎn)生沉淀的方法有:離子交聯(lián),;加入帶相反電荷的聚合物;加入帶相反電荷的疏水基團,;改變pH值,,誘導(dǎo)產(chǎn)生疏水沉淀;溫度誘導(dǎo)產(chǎn)生沉淀,。
親和結(jié)合:將親和配基加入到含有目的物蛋白質(zhì)的溶液中,調(diào)節(jié)好有關(guān)沉淀的條件,,使之有利于親和結(jié)合,。
洗滌:為經(jīng)過處理的粗制液中發(fā)生親和沉淀可能會發(fā)生非特異性結(jié)合,尤其是使用帶電的聚合物,,離子交換的效應(yīng)將使其他蛋白質(zhì)共同沉淀,,因此在分離目的物之前要洗滌沉淀物。其做法是:加入適當(dāng)?shù)那逑磩┲匦氯芙獬恋?,再沉淀,;或在專一性洗脫之前?清洗沉淀。在上述過程中要始終保持目的蛋白質(zhì)與配基處于親和結(jié)合狀態(tài),。
配基-載體復(fù)合物與目的蛋白質(zhì)的分離:分離結(jié)束之后,,要確保回收目的蛋白質(zhì)和配基-載體復(fù)合物,,目的蛋白質(zhì)要達到一定的純度,,回收率要高。
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