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黃曲霉素試劑盒使用說明書

時間:2016/6/12閱讀:2784
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黃曲霉素(AF)酶聯(lián)免疫分析(ELISA

 

 

試劑盒使用說明書

 

 

本試劑盒僅供研究使用,。

 

1 使用目的:

 

本試劑盒用于檢測飼料和谷物中黃曲霉素(AF)含量。

 

2 實驗原理

 

本試劑盒采用直接競爭 ELISA 方法,,在微孔板包被有黃曲霉素(AF)偶聯(lián)抗原,,加入黃曲霉素(AF)標(biāo)準(zhǔn)品或樣品,游離黃曲霉素(AF)與微孔條上預(yù)包被的黃曲霉素偶聯(lián)抗原互相競爭抗黃曲霉素(AF)抗體酶標(biāo)記物,,用 TMB 底物顯色,,加入終止液后顏色由藍(lán)色變?yōu)辄S色,用酶標(biāo)儀在 450nm 波長下進(jìn)行檢測,,吸光值與樣品中黃曲霉素(AF)含量成反比,,通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中黃曲霉素(AF)的含量。

 

3 試劑盒組成

 

  • 預(yù)包被的黃曲霉素(AF)偶聯(lián)抗原的可拆酶標(biāo)板:1 塊(12 孔×4 條),。

 

  • 黃曲霉素(AF)標(biāo)準(zhǔn)品:6 瓶(1ml/瓶),,含量分別是: 0 ng/ml0.1 ng/ml,0.3 ng/ml,0.9 ng/ml,2.7 ng/ml,8.1 ng/ml,。

 

  • AF 抗體酶結(jié)合物:1 瓶(3ml),。

 

  • 顯色液 A1 瓶(3ml)。

 

  • 顯色液 B1 瓶(3ml),。

 

  • 終止液:1 瓶(3ml),,2M 硫酸。

 

  • 樣本稀釋液:1 瓶(10×,   3ml),,用于樣品稀釋用,。

 

  • 濃縮洗滌液:1 瓶(20×20ml),,用于洗板,。

 

  • 說明書一份。

 

  • 需要而未提供的材料

 

4.1 設(shè)備

 

4.1.1波長450nm酶標(biāo)儀,。4.1.2粉碎機,。4.1.3量筒。4.1.4振蕩器,。4.1.5漏斗,。

 

4.1.6Whatman 或相當(dāng)?shù)臑V紙,。

 

4.1.7微量移液器。

 

4.2 試劑

 

4.2.1去離子水或蒸餾水,。

 

4.2.2 甲醇,。

 

  • 貯存

 

  • 試劑盒貯存于2~8℃,切勿冷凍

 

  • 未用完的微孔板應(yīng)該密封干燥保存

 

6 注意事項

 

  • 使用試劑盒前請仔細(xì)閱讀說明書,。

 

  • 不要使用過期試劑盒,。

 

 

1

 

 

  • 試劑盒使用前,將試劑恢復(fù)至室溫(25±2℃),,建議至少回溫2小時,。

 

  • 標(biāo)準(zhǔn)品中含有黃曲霉素(AF),使用時應(yīng)特別注意,,操作時應(yīng)帶手套,。

 

  • 終止液中含有硫酸,使用時防止灼傷皮膚及腐蝕衣物,。

 

  • 不同標(biāo)準(zhǔn)品,、樣品所用吸頭不能混用,否則會影響試驗結(jié)果,。

 

  • 不同批號試劑盒中的試劑不得混用,;不同標(biāo)準(zhǔn)品、樣品所用吸頭不得混用,,否則會影響實驗結(jié)果,。
  • 稀釋樣本時必須用本試劑盒中的樣本稀釋液,否則會影響實驗結(jié)果

 

  • 混合試劑時應(yīng)避免起泡,。

 

7 工作液準(zhǔn)備

 

7.1黃曲霉素(AF)標(biāo)準(zhǔn)品溶液:0ng/ml,0.1ng/ml ,0.3 ng/ml,0.9 ng/ml,2.7 ng/ml,8.1ng/ml

 

  • 濃縮洗滌液:用蒸餾水按1:20(1+19)稀釋備用

 

  • 樣本稀釋液:用蒸餾水按1:10(1+9)稀釋備用

 

  • 顯色劑:已備用,避免光線直照

 

  • 反應(yīng)終止液:已備用

 

8 樣品處理程序(樣品在提取過程中,,要嚴(yán)格按說明書操作,,提取過程中應(yīng)準(zhǔn)確稀釋,否則

 

會出現(xiàn)結(jié)果不準(zhǔn)確,,樣品應(yīng)當(dāng)保存在陰涼避光之處及冷藏保存)

 

8.110g粉碎的樣品,,加 20ml 70%甲醇溶液

 

8.2強力振蕩3分鐘

 

8.3Whatman 濾紙過濾

 

8.425µl處理后的樣品,加入25µl樣本稀釋液于反應(yīng)孔中(樣本稀釋倍數(shù)為2

 

9 酶免分析步驟

 

9.1 實驗須知

 

  • 實驗開始前請將所有試劑于盒外充分恢復(fù)至室溫(25±2℃),,時間約2小時,。回溫至室溫(25±2℃)后再取出微孔條,,多余的微孔條重新密封立即于2~8℃干燥保存注:一定保證回溫充分,,否則影響檢測的度和準(zhǔn)確度。
  • 使用后請立即將試劑放回2~8℃保存

 

  • 請不要改變分析程序

 

  • 請使用的微量移液器

 

  • 操作一旦開始,,請不要中斷任何程序

 

  • ELISA結(jié)果的可重復(fù)性極大程度的取決于操作程序,,請嚴(yán)格按照要求操作

 

  • 為避免交叉污染,,每個標(biāo)準(zhǔn)品和樣品均應(yīng)使用不同的吸頭加樣

 

  • 加樣時請勿讓吸頭接觸微孔中的溶液或內(nèi)表面

 

9.2 分析步驟

 

  • 預(yù)先進(jìn)行編號,標(biāo)記B0,、標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的位置,,推薦進(jìn)行雙孔檢測

 

  • 取所需數(shù)量的微孔(微孔條可拆),將多余板條重新密封并立即放回2~8℃保存

 

  • 樣品稀釋液(10×),、濃縮洗滌液(20×)稀釋成工作液(蒸餾水或去離子水稀釋)

 

  • B0孔中加入50µl0.0 ng/ ml標(biāo)準(zhǔn)品溶液

 

  • 在各標(biāo)準(zhǔn)孔中加入50µl的標(biāo)準(zhǔn)品溶液

 

  • 在各樣品孔中加入50µl樣品溶液

 

  • 在所有孔中加入50µl的抗黃曲霉素(AF)抗體酶結(jié)合物

 

  • 輕輕晃動反應(yīng)板幾秒鐘,。

 

9.3 37℃溫浴30min (溫浴過程中不時輕拍反應(yīng)板,可以減少雙孔誤差)

 

9.3.1 甩掉孔中液體,,用洗液洗滌微孔板5次,,zui后一次應(yīng)在吸水紙上拍打以*除去孔中液體。

 

 

 

2

 

 

9.4 反應(yīng)

 

  • 洗滌程序完成后,,立即用微量移液器在每個微孔中先加入50µl顯色液A,,再加 50µl顯色液B;輕微晃動反應(yīng)板使之*混勻

 

  • 37℃溫浴10min

 

  • 每孔中加入50µl終止液,,混勻

 

  • 450nm下檢測吸光度,,結(jié)果在5min內(nèi)讀取。

 

10 結(jié)果計算

 

10.1定量分析

 

10.1.1所獲得的每個濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣本吸光度值的平均值(B)除以*個標(biāo)準(zhǔn)(0標(biāo)準(zhǔn))的吸光度值(B0)再乘以100%,,即百分吸光度值,。

 

B—標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值B0—0µg/L標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值

 

10.1.2以黃曲霉素(AF)濃度的對數(shù)值為X軸,百分吸光度值為Y軸,,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖,。根據(jù)樣品百分吸光度值,可從曲線上得到對應(yīng)點的橫坐標(biāo),,即為黃曲霉素(AF)濃度的對數(shù)值,,求得反對數(shù)即為測定液中黃曲霉素(AF)濃度Cng/ml10.1.3由于樣品經(jīng)過了預(yù)先稀釋,因此根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線所得出的樣品濃度一定要再乘以其稀釋

 

倍數(shù),。

 

10.2 半定量測定

 

10.1.1目測半定量測定:首先選擇一個適當(dāng)?shù)臉?biāo)準(zhǔn)液與樣品同運行,,根據(jù)樣品與標(biāo)準(zhǔn)品吸光

 

度值的高低比較,判斷樣品濃度值是小于還是大于標(biāo)準(zhǔn)值,。

 

10.1.2儀器半定量測定:首先選擇一個適當(dāng)?shù)臉?biāo)準(zhǔn)液與樣品同運行,,根據(jù)樣品與標(biāo)準(zhǔn)品顏色

 

深淺比較,判斷樣品濃度值是小于還是大于標(biāo)準(zhǔn)值,。

 

11 特異性

 

物質(zhì) 交叉反應(yīng)

 

黃曲霉素B1 100% 黃曲霉素B2 80% 黃曲霉素G1 75% 黃曲霉素G2 30%

 

12 試劑盒參數(shù)

 

本試劑盒檢測下限為0.1ppb B0吸光度*值應(yīng)大于1.0

 

試劑盒吸光度板內(nèi)誤差小于8%,,板間誤差小于15%。用本說明書提供的組織樣本提取方法回收率大于80%,。

13 標(biāo)準(zhǔn)曲線模式(僅供參考)

 

標(biāo) 準(zhǔn) 0.1ng/ml~8.1ng/ml ,。

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

3

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

14 分析限制

 

本試劑盒檢測為陽性的樣品應(yīng)該用另一種方法如HPLCGC/MS加以確證。

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

黃曲霉素(AF)酶聯(lián)免疫分析(ELISA

 

 

試劑盒使用說明書

 

 

本試劑盒僅供研究使用,。

 

1 使用目的:

 

本試劑盒用于檢測飼料和谷物中黃曲霉素(AF)含量,。

 

2 實驗原理

 

本試劑盒采用直接競爭 ELISA 方法,,在微孔板包被有黃曲霉素(AF)偶聯(lián)抗原,加入黃曲霉素(AF)標(biāo)準(zhǔn)品或樣品,,游離黃曲霉素(AF)與微孔條上預(yù)包被的黃曲霉素偶聯(lián)抗原互相競爭抗黃曲霉素(AF)抗體酶標(biāo)記物,,用 TMB 底物顯色,加入終止液后顏色由藍(lán)色變?yōu)辄S色,,用酶標(biāo)儀在 450nm 波長下進(jìn)行檢測,,吸光值與樣品中黃曲霉素(AF)含量成反比,通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中黃曲霉素(AF)的含量,。

 

3 試劑盒組成

 

  • 預(yù)包被的黃曲霉素(AF)偶聯(lián)抗原的可拆酶標(biāo)板:1 塊(12 孔×4 條),。

 

  • 黃曲霉素(AF)標(biāo)準(zhǔn)品:6 瓶(1ml/瓶),含量分別是: 0 ng/ml,,0.1 ng/ml,0.3 ng/ml,0.9 ng/ml,2.7 ng/ml,8.1 ng/ml,。

 

  • AF 抗體酶結(jié)合物:1 瓶(3ml)。

 

  • 顯色液 A1 瓶(3ml),。

 

  • 顯色液 B1 瓶(3ml),。

 

  • 終止液:1 瓶(3ml),2M 硫酸,。

 

  • 樣本稀釋液:1 瓶(10×,   3ml),,用于樣品稀釋用。

 

  • 濃縮洗滌液:1 瓶(20×,,20ml),,用于洗板。

 

  • 說明書一份,。

 

  • 需要而未提供的材料

 

4.1 設(shè)備

 

4.1.1波長450nm酶標(biāo)儀,。4.1.2粉碎機。4.1.3量筒,。4.1.4振蕩器,。4.1.5漏斗。

 

4.1.6Whatman 或相當(dāng)?shù)臑V紙,。

 

4.1.7微量移液器。

 

4.2 試劑

 

4.2.1去離子水或蒸餾水,。

 

4.2.2 甲醇,。

 

  • 貯存

 

  • 試劑盒貯存于2~8℃,切勿冷凍

 

  • 未用完的微孔板應(yīng)該密封干燥保存

 

6 注意事項

 

  • 使用試劑盒前請仔細(xì)閱讀說明書,。

 

  • 不要使用過期試劑盒,。

 

 

1

 

 

  • 試劑盒使用前,將試劑恢復(fù)至室溫(25±2℃),,建議至少回溫2小時,。

 

  • 標(biāo)準(zhǔn)品中含有黃曲霉素(AF),,使用時應(yīng)特別注意,操作時應(yīng)帶手套,。

 

  • 終止液中含有硫酸,,使用時防止灼傷皮膚及腐蝕衣物。

 

  • 不同標(biāo)準(zhǔn)品,、樣品所用吸頭不能混用,,否則會影響試驗結(jié)果。

 

  • 不同批號試劑盒中的試劑不得混用,;不同標(biāo)準(zhǔn)品,、樣品所用吸頭不得混用,否則會影響實驗結(jié)果,。
  • 稀釋樣本時必須用本試劑盒中的樣本稀釋液,,否則會影響實驗結(jié)果

 

  • 混合試劑時應(yīng)避免起泡。

 

7 工作液準(zhǔn)備

 

7.1黃曲霉素(AF)標(biāo)準(zhǔn)品溶液:0ng/ml,0.1ng/ml ,0.3 ng/ml,0.9 ng/ml,2.7 ng/ml,8.1ng/ml

 

  • 濃縮洗滌液:用蒸餾水按1:20(1+19)稀釋備用

 

  • 樣本稀釋液:用蒸餾水按1:10(1+9)稀釋備用

 

  • 顯色劑:已備用,,避免光線直照

 

  • 反應(yīng)終止液:已備用

 

8 樣品處理程序(樣品在提取過程中,,要嚴(yán)格按說明書操作,提取過程中應(yīng)準(zhǔn)確稀釋,,否則

 

會出現(xiàn)結(jié)果不準(zhǔn)確,,樣品應(yīng)當(dāng)保存在陰涼避光之處及冷藏保存)

 

8.110g粉碎的樣品,加 20ml 70%甲醇溶液

 

8.2強力振蕩3分鐘

 

8.3Whatman 濾紙過濾

 

8.425µl處理后的樣品,,加入25µl樣本稀釋液于反應(yīng)孔中(樣本稀釋倍數(shù)為2

 

9 酶免分析步驟

 

9.1 實驗須知

 

  • 實驗開始前請將所有試劑于盒外充分恢復(fù)至室溫(25±2℃),,時間約2小時?;販刂潦覝兀?/span>25±2℃)后再取出微孔條,,多余的微孔條重新密封立即于2~8℃干燥保存注:一定保證回溫充分,否則影響檢測的度和準(zhǔn)確度,。
  • 使用后請立即將試劑放回2~8℃保存

 

  • 請不要改變分析程序

 

  • 請使用的微量移液器

 

  • 操作一旦開始,,請不要中斷任何程序

 

  • ELISA結(jié)果的可重復(fù)性極大程度的取決于操作程序,請嚴(yán)格按照要求操作

 

  • 為避免交叉污染,,每個標(biāo)準(zhǔn)品和樣品均應(yīng)使用不同的吸頭加樣

 

  • 加樣時請勿讓吸頭接觸微孔中的溶液或內(nèi)表面

 

9.2 分析步驟

 

  • 預(yù)先進(jìn)行編號,,標(biāo)記B0、標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的位置,,推薦進(jìn)行雙孔檢測

 

  • 取所需數(shù)量的微孔(微孔條可拆),,將多余板條重新密封并立即放回2~8℃保存

 

  • 樣品稀釋液(10×)、濃縮洗滌液(20×)稀釋成工作液(蒸餾水或去離子水稀釋)

 

  • B0孔中加入50µl0.0 ng/ ml標(biāo)準(zhǔn)品溶液

 

  • 在各標(biāo)準(zhǔn)孔中加入50µl的標(biāo)準(zhǔn)品溶液

 

  • 在各樣品孔中加入50µl樣品溶液

 

  • 在所有孔中加入50µl的抗黃曲霉素(AF)抗體酶結(jié)合物

 

  • 輕輕晃動反應(yīng)板幾秒鐘,。

 

9.3 37℃溫浴30min (溫浴過程中不時輕拍反應(yīng)板,,可以減少雙孔誤差)

 

9.3.1 甩掉孔中液體,用洗液洗滌微孔板5次,zui后一次應(yīng)在吸水紙上拍打以*除去孔中液體,。

 

 

 

2

 

 

9.4 反應(yīng)

 

  • 洗滌程序完成后,,立即用微量移液器在每個微孔中先加入50µl顯色液A,再加 50µl顯色液B,;輕微晃動反應(yīng)板使之*混勻

 

  • 37℃溫浴10min

 

  • 每孔中加入50µl終止液,,混勻

 

  • 450nm下檢測吸光度,結(jié)果在5min內(nèi)讀取,。

 

10 結(jié)果計算

 

10.1定量分析

 

10.1.1所獲得的每個濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣本吸光度值的平均值(B)除以*個標(biāo)準(zhǔn)(0標(biāo)準(zhǔn))的吸光度值(B0)再乘以100%,,即百分吸光度值。

 

B—標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值B0—0µg/L標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值

 

10.1.2以黃曲霉素(AF)濃度的對數(shù)值為X軸,,百分吸光度值為Y軸,,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。根據(jù)樣品百分吸光度值,,可從曲線上得到對應(yīng)點的橫坐標(biāo),,即為黃曲霉素(AF)濃度的對數(shù)值,求得反對數(shù)即為測定液中黃曲霉素(AF)濃度Cng/ml10.1.3由于樣品經(jīng)過了預(yù)先稀釋,,因此根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線所得出的樣品濃度一定要再乘以其稀釋

 

倍數(shù),。

 

10.2 半定量測定

 

10.1.1目測半定量測定:首先選擇一個適當(dāng)?shù)臉?biāo)準(zhǔn)液與樣品同運行,根據(jù)樣品與標(biāo)準(zhǔn)品吸光

 

度值的高低比較,,判斷樣品濃度值是小于還是大于標(biāo)準(zhǔn)值,。

 

10.1.2儀器半定量測定:首先選擇一個適當(dāng)?shù)臉?biāo)準(zhǔn)液與樣品同運行,根據(jù)樣品與標(biāo)準(zhǔn)品顏色

 

深淺比較,,判斷樣品濃度值是小于還是大于標(biāo)準(zhǔn)值,。

 

11 特異性

 

物質(zhì) 交叉反應(yīng)

 

黃曲霉素B1 100% 黃曲霉素B2 80% 黃曲霉素G1 75% 黃曲霉素G2 30%

 

12 試劑盒參數(shù)

 

本試劑盒檢測下限為0.1ppb B0吸光度*值應(yīng)大于1.0

 

試劑盒吸光度板內(nèi)誤差小于8%,板間誤差小于15%,。用本說明書提供的組織樣本提取方法回收率大于80%,。

13 標(biāo)準(zhǔn)曲線模式(僅供參考)

 

標(biāo) 準(zhǔn) 0.1ng/ml~8.1ng/ml

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

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14 分析限制

 

本試劑盒檢測為陽性的樣品應(yīng)該用另一種方法如HPLCGC/MS加以確證,。

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

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