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黃曲霉素(AF)酶聯(lián)免疫分析(ELISA)
試劑盒使用說明書
本試劑盒僅供研究使用,。
1 使用目的:
本試劑盒用于檢測飼料和谷物中黃曲霉素(AF)含量。
2 實驗原理
本試劑盒采用直接競爭 ELISA 方法,,在微孔板包被有黃曲霉素(AF)偶聯(lián)抗原,,加入黃曲霉素(AF)標(biāo)準(zhǔn)品或樣品,游離黃曲霉素(AF)與微孔條上預(yù)包被的黃曲霉素偶聯(lián)抗原互相競爭抗黃曲霉素(AF)抗體酶標(biāo)記物,,用 TMB 底物顯色,,加入終止液后顏色由藍(lán)色變?yōu)辄S色,用酶標(biāo)儀在 450nm 波長下進(jìn)行檢測,,吸光值與樣品中黃曲霉素(AF)含量成反比,,通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中黃曲霉素(AF)的含量。
3 試劑盒組成
4.1 設(shè)備
4.1.1波長450nm酶標(biāo)儀,。4.1.2粉碎機,。4.1.3量筒。4.1.4振蕩器,。4.1.5漏斗,。
4.1.6Whatman 或相當(dāng)?shù)臑V紙,。
4.1.7微量移液器。
4.2 試劑
4.2.1去離子水或蒸餾水,。
4.2.2 甲醇,。
6 注意事項
1
7 工作液準(zhǔn)備
7.1黃曲霉素(AF)標(biāo)準(zhǔn)品溶液:0ng/ml,0.1ng/ml ,0.3 ng/ml,0.9 ng/ml,2.7 ng/ml,8.1ng/ml
8 樣品處理程序(樣品在提取過程中,,要嚴(yán)格按說明書操作,,提取過程中應(yīng)準(zhǔn)確稀釋,否則
會出現(xiàn)結(jié)果不準(zhǔn)確,,樣品應(yīng)當(dāng)保存在陰涼避光之處及冷藏保存)
8.1取10g粉碎的樣品,,加 20ml 70%甲醇溶液
8.2強力振蕩3分鐘
8.3用Whatman 濾紙過濾
8.4取25µl處理后的樣品,加入25µl樣本稀釋液于反應(yīng)孔中(樣本稀釋倍數(shù)為2)
9 酶免分析步驟
9.1 實驗須知
9.2 分析步驟
9.3 37℃溫浴30min (溫浴過程中不時輕拍反應(yīng)板,可以減少雙孔誤差)
9.3.1 甩掉孔中液體,,用洗液洗滌微孔板5次,,zui后一次應(yīng)在吸水紙上拍打以*除去孔中液體。
2
9.4 反應(yīng)
10 結(jié)果計算
10.1定量分析
10.1.1所獲得的每個濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣本吸光度值的平均值(B)除以*個標(biāo)準(zhǔn)(0標(biāo)準(zhǔn))的吸光度值(B0)再乘以100%,,即百分吸光度值,。
B—標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值B0—0µg/L標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值
10.1.2以黃曲霉素(AF)濃度的對數(shù)值為X軸,百分吸光度值為Y軸,,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖,。根據(jù)樣品百分吸光度值,可從曲線上得到對應(yīng)點的橫坐標(biāo),,即為黃曲霉素(AF)濃度的對數(shù)值,,求得反對數(shù)即為測定液中黃曲霉素(AF)濃度C(ng/ml)10.1.3由于樣品經(jīng)過了預(yù)先稀釋,因此根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線所得出的樣品濃度一定要再乘以其稀釋
倍數(shù),。
10.2 半定量測定
10.1.1目測半定量測定:首先選擇一個適當(dāng)?shù)臉?biāo)準(zhǔn)液與樣品同運行,,根據(jù)樣品與標(biāo)準(zhǔn)品吸光
度值的高低比較,判斷樣品濃度值是小于還是大于標(biāo)準(zhǔn)值,。
10.1.2儀器半定量測定:首先選擇一個適當(dāng)?shù)臉?biāo)準(zhǔn)液與樣品同運行,,根據(jù)樣品與標(biāo)準(zhǔn)品顏色
深淺比較,判斷樣品濃度值是小于還是大于標(biāo)準(zhǔn)值,。
11 特異性
物質(zhì) 交叉反應(yīng)
黃曲霉素B1 100% 黃曲霉素B2 80% 黃曲霉素G1 75% 黃曲霉素G2 30%
12 試劑盒參數(shù)
本試劑盒檢測下限為0.1ppb B0吸光度*值應(yīng)大于1.0
試劑盒吸光度板內(nèi)誤差小于8%,,板間誤差小于15%。用本說明書提供的組織樣本提取方法回收率大于80%,。
13 標(biāo)準(zhǔn)曲線模式(僅供參考)
試 劑 盒 提 供 的 標(biāo) 準(zhǔn) 曲 線 范 圍 為 0.1ng/ml~8.1ng/ml ,。
3
14 分析限制
本試劑盒檢測為陽性的樣品應(yīng)該用另一種方法如HPLC或GC/MS加以確證。
黃曲霉素(AF)酶聯(lián)免疫分析(ELISA)
試劑盒使用說明書
本試劑盒僅供研究使用,。
1 使用目的:
本試劑盒用于檢測飼料和谷物中黃曲霉素(AF)含量,。
2 實驗原理
本試劑盒采用直接競爭 ELISA 方法,,在微孔板包被有黃曲霉素(AF)偶聯(lián)抗原,加入黃曲霉素(AF)標(biāo)準(zhǔn)品或樣品,,游離黃曲霉素(AF)與微孔條上預(yù)包被的黃曲霉素偶聯(lián)抗原互相競爭抗黃曲霉素(AF)抗體酶標(biāo)記物,,用 TMB 底物顯色,加入終止液后顏色由藍(lán)色變?yōu)辄S色,,用酶標(biāo)儀在 450nm 波長下進(jìn)行檢測,,吸光值與樣品中黃曲霉素(AF)含量成反比,通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中黃曲霉素(AF)的含量,。
3 試劑盒組成
4.1 設(shè)備
4.1.1波長450nm酶標(biāo)儀,。4.1.2粉碎機。4.1.3量筒,。4.1.4振蕩器,。4.1.5漏斗。
4.1.6Whatman 或相當(dāng)?shù)臑V紙,。
4.1.7微量移液器。
4.2 試劑
4.2.1去離子水或蒸餾水,。
4.2.2 甲醇,。
6 注意事項
1
7 工作液準(zhǔn)備
7.1黃曲霉素(AF)標(biāo)準(zhǔn)品溶液:0ng/ml,0.1ng/ml ,0.3 ng/ml,0.9 ng/ml,2.7 ng/ml,8.1ng/ml
8 樣品處理程序(樣品在提取過程中,,要嚴(yán)格按說明書操作,提取過程中應(yīng)準(zhǔn)確稀釋,,否則
會出現(xiàn)結(jié)果不準(zhǔn)確,,樣品應(yīng)當(dāng)保存在陰涼避光之處及冷藏保存)
8.1取10g粉碎的樣品,加 20ml 70%甲醇溶液
8.2強力振蕩3分鐘
8.3用Whatman 濾紙過濾
8.4取25µl處理后的樣品,,加入25µl樣本稀釋液于反應(yīng)孔中(樣本稀釋倍數(shù)為2)
9 酶免分析步驟
9.1 實驗須知
9.2 分析步驟
9.3 37℃溫浴30min (溫浴過程中不時輕拍反應(yīng)板,,可以減少雙孔誤差)
9.3.1 甩掉孔中液體,用洗液洗滌微孔板5次,zui后一次應(yīng)在吸水紙上拍打以*除去孔中液體,。
2
9.4 反應(yīng)
10 結(jié)果計算
10.1定量分析
10.1.1所獲得的每個濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣本吸光度值的平均值(B)除以*個標(biāo)準(zhǔn)(0標(biāo)準(zhǔn))的吸光度值(B0)再乘以100%,,即百分吸光度值。
B—標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值B0—0µg/L標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值
10.1.2以黃曲霉素(AF)濃度的對數(shù)值為X軸,,百分吸光度值為Y軸,,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。根據(jù)樣品百分吸光度值,,可從曲線上得到對應(yīng)點的橫坐標(biāo),,即為黃曲霉素(AF)濃度的對數(shù)值,求得反對數(shù)即為測定液中黃曲霉素(AF)濃度C(ng/ml)10.1.3由于樣品經(jīng)過了預(yù)先稀釋,,因此根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線所得出的樣品濃度一定要再乘以其稀釋
倍數(shù),。
10.2 半定量測定
10.1.1目測半定量測定:首先選擇一個適當(dāng)?shù)臉?biāo)準(zhǔn)液與樣品同運行,根據(jù)樣品與標(biāo)準(zhǔn)品吸光
度值的高低比較,,判斷樣品濃度值是小于還是大于標(biāo)準(zhǔn)值,。
10.1.2儀器半定量測定:首先選擇一個適當(dāng)?shù)臉?biāo)準(zhǔn)液與樣品同運行,根據(jù)樣品與標(biāo)準(zhǔn)品顏色
深淺比較,,判斷樣品濃度值是小于還是大于標(biāo)準(zhǔn)值,。
11 特異性
物質(zhì) 交叉反應(yīng)
黃曲霉素B1 100% 黃曲霉素B2 80% 黃曲霉素G1 75% 黃曲霉素G2 30%
12 試劑盒參數(shù)
本試劑盒檢測下限為0.1ppb B0吸光度*值應(yīng)大于1.0
試劑盒吸光度板內(nèi)誤差小于8%,板間誤差小于15%,。用本說明書提供的組織樣本提取方法回收率大于80%,。
13 標(biāo)準(zhǔn)曲線模式(僅供參考)
試 劑 盒 提 供 的 標(biāo) 準(zhǔn) 曲 線 范 圍 為 0.1ng/ml~8.1ng/ml 。
3
14 分析限制
本試劑盒檢測為陽性的樣品應(yīng)該用另一種方法如HPLC或GC/MS加以確證,。
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