您好, 歡迎來到化工儀器網(wǎng),! 登錄| 免費(fèi)注冊(cè)| 產(chǎn)品展廳| 收藏商鋪|
當(dāng)前位置:上海一基實(shí)業(yè)有限公司>>技術(shù)文章>>酶免疫電泳技術(shù)
一,,酶免疫電泳技術(shù)的原理
抗原與抗體在瓊脂糖凝膠中電泳時(shí),,在堿性緩沖液的條件下,抗原帶負(fù)電,,向正極移動(dòng),。不同分子量或還不同電荷的抗原,在相同條件下,,移動(dòng)距離不等,。這些在不同部位的抗原,再與相關(guān)抗體經(jīng)擴(kuò)散形成免疫沉淀線,。酶免疫電泳技術(shù)中的抗原與抗體就是酶和它的相應(yīng)抗體球蛋白,。酶抗原與酶抗體形成的免疫復(fù)合物是用底物顯色的,由于酶反應(yīng)的高度靈敏性,,使酶免疫電泳技術(shù)成為一項(xiàng)靈敏度高的檢測(cè)技術(shù),,但僅局限于酶蛋白的分析鑒定。
二,,辣根過氧化物酶(HRP)免疫電泳技術(shù)的程序
1,, 器材與設(shè)備
電泳儀(包括電泳槽);溫箱,;載玻片(7.5cm×2.5cm);小玻棒(長(zhǎng)4cm左右,,直徑約1.5mm);打孔器,;鋪有濕紗布的帶蓋搪瓷盒,。
2, 材料與試劑
感染病毒的植物病葉,,健株葉片作對(duì)照;辣根過氧化物酶(精制)制備的兔抗酶抗體,;瓊脂糖,;0.1mol/pH8.6巴比妥鈉鹽酸緩沖液;底物與供氫體混合液(H2O2和DAB-4HC1),。
3,,實(shí)驗(yàn)程序
(1)將小玻棒放在潔凈的載玻片中央,然后將3ml溶化的瓊脂糖溶液(0.8g瓊脂糖/100ml巴比妥鈉鹽酸緩沖液)澆制其上,待冷凝后,,用針尖挑去玻棒,,中央出現(xiàn)一穴槽。
(2)在穴槽一端的兩側(cè)近邊沿2mm處各打一小孔(直徑2-3mm),在一孔穴中加入健株葉片汁液,,在另一孔穴加入感染病毒的植株葉片汁液,。
(3)加汁液的孔穴一端接負(fù)極,電泳緩沖液仍是0.1mol/LpH8.6巴比妥鈉鹽酸緩沖液,,電壓150V,,電泳1h。
(4)在穴槽加入抗HRP兔血清,,置于濕盒中,,在37℃溫箱中反應(yīng)3h左右或室溫過夜。
(5)在生理鹽水中浸洗3-4天,,每天換水3次,。
(6) 敷上干凈的濕濾紙,置于40℃烘箱內(nèi)烘干,。
(7)浸入底物顯色,,從沉淀弧的形狀,部位不同,,比較健,,病汁液所形成的沉淀線。
請(qǐng)輸入賬號(hào)
請(qǐng)輸入密碼
請(qǐng)輸驗(yàn)證碼
以上信息由企業(yè)自行提供,,信息內(nèi)容的真實(shí)性、準(zhǔn)確性和合法性由相關(guān)企業(yè)負(fù)責(zé),,化工儀器網(wǎng)對(duì)此不承擔(dān)任何保證責(zé)任,。
溫馨提示:為規(guī)避購(gòu)買風(fēng)險(xiǎn),,建議您在購(gòu)買產(chǎn)品前務(wù)必確認(rèn)供應(yīng)商資質(zhì)及產(chǎn)品質(zhì)量。