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胰蛋白酶解離法檢測(cè)HBsAg-CIC

時(shí)間:2012/5/15閱讀:2081
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用3.5%PEG選擇性地沉淀血清中CIC,,繼之用胰蛋白酶消化沉淀物中的抗體蛋白,,分離出抗原部分,用反向間接血凝法測(cè)定HBsAg滴度,。與不加胰蛋白酶的對(duì)照管比較,,如HBsAg滴度升高,則說明有HBsAg-CIC的存在,。

1.試劑
①pH8.4硼酸鹽緩沖液(BBS):配制法同*節(jié)中PEG沉淀試驗(yàn),;
②7%PEG及3.5%PEG溶液:用BBS配制;
③10mg/mL胰蛋白酶溶液:用pH8.2巴比妥緩沖液配制,。

2.操作步驟
(1)在測(cè)定管與對(duì)照管內(nèi)務(wù)加待測(cè)血清0.2mL,。
(2)兩管各加pH8.4BBSl.8mL,將血清作1:10稀釋,。
(3)各加7%PEG 2mL,,充分混勻后,4~C冰箱放置18h,。
(4)在10%左右條件下2 500r/min離心20min,,棄上清
(5)將沉淀物懸浮于4mL 3.5%PEG溶液中,2 500r/rain離心20min,,棄上清,。
(6)于測(cè)定管中加入0.2mL胰蛋白酶溶液,對(duì)照管加0.2mLBBS,,混勻后置37%水浴30rain,,其間振蕩3—4次。取出后,,立即置56%水浴5min,。
(7)將測(cè)定管、對(duì)照管及未經(jīng)處理的血清分別作系列倍比稀釋,,用反向間接血凝試驗(yàn)檢測(cè)HBsAg滴度,。

3.結(jié)果判斷
①測(cè)定管HBsAg滴度在1/16以上,且滴度高于對(duì)照管1個(gè)稀釋度以上者為HBsAg-CIC陽性,;
②測(cè)定管與對(duì)照管HBsAg滴度相同,,但其滴度高于血清游離HBsAg1個(gè)稀釋度以上者也為HBsAg-CIC陽性。

4.臨床意義 胰蛋白酶解離法檢測(cè)HBs-Ag-CIC簡便而敏感,,有助于確定乙肝病程中有無抗原特異性復(fù)合物形成,,估計(jì)是否有可能形成肝外系統(tǒng)病變。

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