上海一基實業(yè)有限公司主要從事免疫學(xué)、分子生物學(xué)和常規(guī)生化試劑的研發(fā),、銷售,。并代理銷售Sigma、America ,、等多個國外。
：,，60526762, 60526763
                       ,，.

 本試劑盒只能用于科學(xué)研究，不得用于醫(yī)學(xué)診斷,。

魚補體3（C3）定量檢測試劑盒（ELISA）

使用說明書

【試劑盒名稱】

魚補體3（C3）定量檢測試劑盒（ELISA）

【試劑盒用途】

定量檢測魚血清,、血漿及相關(guān)液體樣本中補體3（C3）的含量。

【檢測原理】

本試劑盒采用雙抗體兩步夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）,。將標(biāo)準(zhǔn)品,、待測樣本加入到預(yù)先包被魚補體3（C3）單克隆抗體透明酶標(biāo)包被板中，溫育足夠時間后,，洗滌除去未結(jié)合的成分,，再加入酶標(biāo)工作液，溫育足夠時間后，洗滌除去未結(jié)合的成分,。依次加入底物A,、B，底物（TMB）在辣根過氧化物酶（HRP）催化下轉(zhuǎn)化為藍(lán)色產(chǎn)物,，在酸的作用下變成黃色,，顏色的深淺與樣品中魚補體3（C3）濃度呈正相關(guān)，450nm波長下測定OD值,，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的OD值,，計算樣本中魚補體3（C3）含量。

【試劑盒組成】

備注：標(biāo)準(zhǔn)品（1號→6號）濃度依次為：160、80,、40,、20、10,、5 μg/mL

【需要而未提供的試劑和器材】

1、37℃恒溫箱

2,、標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格酶標(biāo)儀

3,、精密移液器及一次性吸頭

4、蒸餾水

5,、一次性試管

6,、吸水紙

【操作步驟】

1、準(zhǔn)備：從冰箱取出試劑盒,，室溫復(fù)溫平衡30分鐘,。

2、配液：用蒸餾水將20倍濃縮洗滌液稀釋成原倍的洗滌液,。

3,、加標(biāo)準(zhǔn)品和待測樣本：取足夠數(shù)量的酶標(biāo)包被板，固定于框架上,，分別設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔,、待測樣本孔和空白對照孔，記錄各孔位置,，在標(biāo)準(zhǔn)品孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品50μL,；待測樣本孔中先加入待測樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL（即樣本稀釋5倍）,；空白對照孔不加,。

4、溫育：37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min,。

5,、洗板：棄去液體,，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液,，靜置1min,，甩去洗滌液，吸水紙上拍干,，如此重復(fù)洗板4次（也可用洗板機按說明書操作洗板）,。

6、加酶標(biāo)工作液：每孔加入酶標(biāo)工作液50μL,，空白對照孔不加,。

7、溫育：37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min,。

8,、洗板：棄去液體，吸水紙上拍干,，每孔加滿洗滌液,，靜置1min，甩去洗滌液,，吸水紙上拍干,，如此重復(fù)洗板4次（也可用洗板機按說明書操作洗板）。

9,、顯色：每孔先加入顯色劑A 液50μL,，再加入顯色劑B液 50μL，平板混勻器混勻30s（或用手輕輕震蕩混勻30s）,，37℃避光顯色15min,。

10、終止：取出酶標(biāo)板,，每孔加終止液50μL,，終止反應(yīng)（顏色由藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。

11,、測定：以空白孔調(diào)零,，在終止后15分鐘內(nèi)，用450nm波長測量各孔的吸光值（OD值）,。

12、計算：根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的濃度及對應(yīng)的OD值,，計算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程,，再根據(jù)樣本的OD值，在回歸方程上計算出對應(yīng)的樣品濃度,，也可以使用各種應(yīng)用軟件來計算,。zui終濃度為實際測定濃度乘以稀釋倍數(shù),。

【樣本要求】

1、樣本不能含疊氮鈉（NaN₃）,，因為疊氮鈉（NaN₃）是辣根過氧化物酶（HRP）的抑制劑,。

2、標(biāo)本采集后盡早進行提取,，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進行,，提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能立即試驗,，可將標(biāo)本放于-20℃保存,，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

3,、樣本應(yīng)充分離心,，不得有溶血及顆粒。

【注意事項】

1,、實驗嚴(yán)格按照說明書的操作進行,，實驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。

2,、酶標(biāo)包被板開封后如未用完,，應(yīng)立即裝入密封袋中加干燥劑保存。

3,、建議所有的標(biāo)準(zhǔn)品,、樣本和空白對照都做雙份檢測，取平均值,，以減小實驗誤差,。

4、牢記樣本已經(jīng)稀釋5倍,，計算結(jié)果乘以5才是樣本實際濃度,。

5、本試劑盒定量范圍為5-160μg/mL,，超過此范圍,，為標(biāo)準(zhǔn)曲線延伸計算所得，不做為準(zhǔn)確定量結(jié)果,，請用特殊稀釋液稀釋后測定準(zhǔn)確結(jié)果（5-160μg/mL范圍內(nèi)）,，乘以總稀釋倍數(shù)即為樣本zui終濃度。

6,、若顯色過淺,，可適當(dāng)延長底物溫育時間。

7,、為避免交叉污染,，標(biāo)準(zhǔn)品,、樣本和空白對照每加一個就要更換一次吸頭；酶標(biāo)工作液,、樣本稀釋液和底物等公共組分,，要懸臂加樣，不得碰到微孔,；不得重復(fù)使用封板膜,。

8、試劑盒保質(zhì)期內(nèi)使用,，不同批號的試劑不得混用,。

9、底物B對光敏感,，避免長時間暴露于光下,。

【操作程序總結(jié)】

準(zhǔn)備試劑，樣品和標(biāo)準(zhǔn)品

加入準(zhǔn)備好的樣品和標(biāo)準(zhǔn)品,，37℃反應(yīng)30分鐘

洗板4次,，加入酶標(biāo)試劑，37℃反應(yīng)30分鐘

洗板4次,，加入顯色液A,、B，37℃顯色15分鐘

加入終止液

15分鐘之內(nèi)讀OD值

計算

【檢測范圍】

5μg/mL - 160μg/mL

【規(guī)格】

96人份/盒

【貯藏】

2-8℃,，避光防潮保存,。

【有效期】

6個月