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1	酶標包被板	12孔×8條	7	顯色劑A液	6mL
2	標準品	0.3mL×6管	8	顯色劑B液	6mL
3	20倍濃縮洗滌液	25mL	9	終止液	6mL
4	樣本稀釋液	6mL	10	說明書	1份
5	特殊稀釋液	6mL	11	封板膜	2張
6	酶標試劑	6mL	12	密封袋	1個

備注：標準品（1號→6號）濃度依次為：80,、40,、20、10,、5、2.5 μg/L.

【需要而未提供的試劑和器材】

1,、37℃恒溫箱

【操作步驟】

1,、準備：從冰箱取出試劑盒,，室溫復(fù)溫平衡30分鐘。

2,、配液：用蒸餾水將20倍濃縮洗滌液稀釋成原倍的洗滌液,。

3、加標準品和待測樣本：取足夠數(shù)量的酶標包被板,，固定于框架上,，分別設(shè)置標準品孔、待測樣本孔和空白對照孔,，記錄各孔位置,，在標準品孔中加入標準品50μL；待測樣本孔中先加入待測樣本10μL,，再加樣本稀釋液40μL（即樣本稀釋5倍）,；空白對照孔不加。

4,、溫育：37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min,。

5,、洗板：棄去液體，吸水紙上拍干,，每孔加滿洗滌液,，靜置1min，甩去洗滌液,，吸水紙上拍干,，如此重復(fù)洗板4次（也可用洗板機按說明書操作洗板）。

6,、加酶標工作液：每孔加入酶標工作液50μL,，空白對照孔不加。

7,、溫育：37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min,。

8、洗板：棄去液體,，吸水紙上拍干,，每孔加滿洗滌液，靜置1min,，甩去洗滌液,，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板4次（也可用洗板機按說明書操作洗板）,。

9,、顯色：每孔先加入顯色劑A 液50μL，再加入顯色劑B液 50μL,，平板混勻器混勻30s（或用手輕輕震蕩混勻30s）,，37℃避光顯色15min。

10,、終止：取出酶標板,，每孔加終止液50μL，終止反應(yīng)（顏色由藍色立轉(zhuǎn)黃色）,。

11,、測定：以空白孔調(diào)零，在終止后15分鐘內(nèi),，用450nm波長測量各孔的吸光值（OD值）,。

12、計算：根據(jù)標準品的濃度及對應(yīng)的OD值,，計算出標準曲線的直線回歸方程,，再根據(jù)樣本的OD值，在回歸方程上計算出對應(yīng)的樣品濃度,，也可以使用各種應(yīng)用軟件來計算,。zui終濃度為實際測定濃度乘以稀釋倍數(shù),。

【樣本要求】

1、樣本不能含疊氮鈉（NaN₃）,，因為疊氮鈉（NaN₃）是辣根過氧化物酶（HRP）的抑制劑,。

3,、樣本應(yīng)充分離心,，不得有溶血及顆粒。

【注意事項】

1,、實驗嚴格按照說明書的操作進行,，實驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準。

2,、酶標包被板開封后如未用完,，應(yīng)立即裝入密封袋中加干燥劑保存。

3,、建議所有的標準品、樣本和空白對照都做雙份檢測,，取平均值,，以減小實驗誤差。

4,、牢記樣本已經(jīng)稀釋5倍,，計算結(jié)果乘以5才是樣本實際濃度。

5,、本試劑盒定量范圍為2.5-80μg/L,，超過此范圍，為標準曲線延伸計算所得,，不做為準確定量結(jié)果,，請用特殊稀釋液稀釋后測定準確結(jié)果（2.5-80μg/L范圍內(nèi)），乘以總稀釋倍數(shù)即為樣本zui終濃度,。

6,、若顯色過淺，可適當(dāng)延長底物溫育時間,。

7,、為避免交叉污染,，標準品、樣本和空白對照每加一個就要更換一次吸頭,；酶標工作液,、樣本稀釋液和底物等公共組分，要懸臂加樣,，不得碰到微孔,；不得重復(fù)使用封板膜。

8,、試劑盒保質(zhì)期內(nèi)使用,，不同批號的試劑不得混用。

9,、底物B對光敏感,，避免長時間暴露于光下。

【操作程序總結(jié)】

準備試劑,，樣品和標準品

加入準備好的樣品和標準品,，37℃反應(yīng)30分鐘

洗板4次，加入酶標試劑,，37℃反應(yīng)30分鐘

洗板4次,，加入顯色液A、B,，37℃顯色15分鐘

加入終止液

15分鐘之內(nèi)讀OD值

計算

【檢測范圍】

【規(guī)格】

【貯藏】

【有效期】



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