上海一基實業(yè)有限公司是一家集經(jīng)銷批發(fā)、招商代理的有限責(zé)任公司,，是一家經(jīng)國家相關(guān)部門批準(zhǔn)注冊的企業(yè)。主要經(jīng)營ELISA試劑盒,、細胞,、血清、抗體、生物試劑,、培養(yǎng)基,、等產(chǎn)品，具體請.
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本試劑盒采用雙抗體兩步夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）,。將標(biāo)準(zhǔn)品、待測樣本加入到預(yù)先包被大鼠血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）單克隆抗體透明酶標(biāo)包被板中,，溫育足夠時間后,，洗滌除去未結(jié)合的成分，再加入酶標(biāo)工作液,，溫育足夠時間后,，洗滌除去未結(jié)合的成分。依次加入底物A,、B,，底物（TMB）在辣根過氧化物酶（HRP）催化下轉(zhuǎn)化為藍色產(chǎn)物，在酸的作用下變成黃色,，顏色的深淺與樣品中大鼠血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）濃度呈正相關(guān),，450nm波長下測定OD值,，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的OD值,，計算樣本中大鼠血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）含量。 1、準(zhǔn)備：從冰箱取出試劑盒,，室溫復(fù)溫平衡30分鐘,。
2、配液：用蒸餾水將20倍濃縮洗滌液稀釋成原倍的洗滌液。
3,、加標(biāo)準(zhǔn)品和待測樣本：取足夠數(shù)量的酶標(biāo)包被板,，固定于框架上，分別設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔,、待測樣本孔和空白對照孔,，記錄各孔位置，在標(biāo)準(zhǔn)品孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品50μL,；待測樣本孔中先加入待測樣本10μL,，再加樣本稀釋液40μL（即樣本稀釋5倍）；空白對照孔不加,。
4,、溫育：37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min。
5,、洗板：棄去液體,，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液,，靜置1min,，甩去洗滌液，吸水紙上拍干,，如此重復(fù)洗板4次（也可用洗板機按說明書操作洗板）,。
6、加酶標(biāo)工作液：每孔加入酶標(biāo)工作液50μL,，空白對照孔不加,。
7、溫育：37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min,。
8,、洗板：棄去液體，吸水紙上拍干,，每孔加滿洗滌液,，靜置1min，甩去洗滌液,，吸水紙上拍干,，如此重復(fù)洗板4次（也可用洗板機按說明書操作洗板）。
9,、顯色：每孔先加入顯色劑A 液50μL,，再加入顯色劑B液 50μL，平板混勻器混勻30s（或用手輕輕震蕩混勻30s）,，37℃避光顯色15min,。
10,、終止：取出酶標(biāo)板，每孔加終止液50μL,，終止反應(yīng)（顏色由藍色立轉(zhuǎn)黃色）,。
11、測定：以空白孔調(diào)零,，在終止后15分鐘內(nèi),，用450nm波長測量各孔的吸光值（OD值）。
12,、計算：根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的濃度及對應(yīng)的OD值,，計算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程，再根據(jù)樣本的OD值,，在回歸方程上計算出對應(yīng)的樣品濃度,，也可以使用各種應(yīng)用軟件來計算。zui終濃度為實際測定濃度乘以稀釋倍數(shù),。
【大鼠血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）Elisa試劑盒樣本要求】
1,、樣本不能含疊氮鈉（NaN3），因為疊氮鈉（NaN3）是辣根過氧化物酶（HRP）的抑制劑,。
2,、標(biāo)本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行,，提取后應(yīng)盡快進行實驗,。若不能立即試驗，可將標(biāo)本放于-20℃保存,，但應(yīng)避免反復(fù)凍融,。
3、樣本應(yīng)充分離心,，不得有溶血及顆粒,。
【大鼠血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）Elisa試劑盒注意事項】
1,、實驗嚴(yán)格按照說明書的操作進行,，實驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。
2,、酶標(biāo)包被板開封后如未用完,，應(yīng)立即裝入密封袋中加干燥劑保存。
3,、建議所有的標(biāo)準(zhǔn)品,、樣本和空白對照都做雙份檢測，取平均值,，以減小實驗誤差,。
4,、牢記樣本已經(jīng)稀釋5倍，計算結(jié)果乘以5才是樣本實際濃度,。
5,、本試劑盒定量范圍為10-320ng/L，超過此范圍,，為標(biāo)準(zhǔn)曲線延伸計算所得,，不做為準(zhǔn)確定量結(jié)果，請用特殊稀釋液稀釋后測定準(zhǔn)確結(jié)果（10-320ng/L范圍內(nèi)）,，乘以總稀釋倍數(shù)即為樣本zui終濃度,。
6、若顯色過淺,，可適當(dāng)延長底物溫育時間,。
7、為避免交叉污染,，標(biāo)準(zhǔn)品,、樣本和空白對照每加一個就要更換一次吸頭；酶標(biāo)工作液,、樣本稀釋液和底物等公共組分,，要懸臂加樣，不得碰到微孔,；不得重復(fù)使用封板膜,。
8、試劑盒保質(zhì)期內(nèi)使用,，不同批號的試劑不得混用,。
9、底物B對光敏感,，避免長時間暴露于光下,。
【大鼠血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）Elisa試劑盒操作程序總結(jié)】
準(zhǔn)備試劑，樣品和標(biāo)準(zhǔn)品
加入準(zhǔn)備好的樣品和標(biāo)準(zhǔn)品,，37℃反應(yīng)30分鐘
洗板4次,，加入酶標(biāo)試劑，37℃反應(yīng)30分鐘
洗板4次,，加入顯色液A,、B，37℃顯色15分鐘
加入終止液
15分鐘之內(nèi)讀OD值
計算
