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上海一基實(shí)業(yè)有限公司
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YIJI細(xì)菌堿性磷酸酶活性比色法定量檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)(中文版)

時(shí)間:2018/1/15閱讀:4337
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YIJI細(xì)菌堿性磷酸酶活性比色法定量檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)(中文版)

 

主要用途

 

YIJI細(xì)菌堿性磷酸酶活性比色法定量檢測(cè)試劑是一種旨在通過(guò)底物對(duì)硝基苯磷酸受到堿性磷酸酶的水解,,產(chǎn)生有色產(chǎn)物,在分光光度儀下,,其吸光峰值的變化,,即采用比色法定量測(cè)定細(xì)菌樣品中酶活性而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過(guò)精心研制,、成功實(shí)驗(yàn)證明的,。其適用于各種細(xì)菌菌株(野生或培養(yǎng))裂解樣品堿性磷酸酶的活性檢測(cè)。產(chǎn)品嚴(yán)格無(wú)菌,,即到即用,,活體檢測(cè),操作簡(jiǎn)捷,,性能穩(wěn)定。

 

技術(shù)背景

 

堿性磷酸酶(Alkaline Phophatase,;ALP,;EC3.1.3.1)存在于許多細(xì)菌細(xì)胞中的外周膜結(jié)合性酶,,為同源二聚體金屬性酶蛋白,。一旦細(xì)菌的磷濃度過(guò)低,,則誘導(dǎo)堿性磷酸酶的活性,,其功能在于參與細(xì)菌磷代謝,。在分子生物學(xué)和免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)和診斷運(yùn)用中,堿性磷酸酶成為一種重要的工具,。堿性磷酸酶在堿性條件下水解單磷酸?;诘孜?/font>對(duì)硝基苯磷酸p-nitrophenyl phosphate,;PNPP),在堿性磷酸酶催化水解下,,釋放出對(duì)硝基苯酚p-nitrophenol)和磷酸(phosphate),,通過(guò)分光光度儀檢測(cè)對(duì)硝基苯酚410nm,來(lái)定量測(cè)定堿性磷酸酶的活性,。堿性磷酸酶反應(yīng)系統(tǒng)為:

Alkaline Phophatase

p-nitrophenyl phosphate  +  H2O       p-nitrophenol  +  inorganic phosphate

 

產(chǎn)品內(nèi)容

 

YIJI裂解液(Reagent A)    10毫升

YIJI活性液(Reagent B 250微升

YIJI緩沖液(Reagent C  20毫升

YIJI反應(yīng)液(Reagent D   2毫升

產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)      1

 

保存方式

 

保存YIJI活性液(Reagent B在-20冰箱里,,其余的保存在4℃冰箱里;YIJI反應(yīng)液(Reagent D)避免光照,;有效保證3月,;一旦打開(kāi)使用,有效保證12

 

用戶自備

 

1.5毫升離心管:用于樣品保存的容器

15毫升錐形離心管:用于樣品操作的容器

(微型)臺(tái)式離心機(jī):用于樣品制備

比色皿或96板:用于比色的容器

分光光度儀或酶標(biāo)儀:用于比色分析

 

 

實(shí)驗(yàn)步驟

 

一,、 樣品準(zhǔn)備

 

1. 準(zhǔn)備好10毫升待測(cè)的細(xì)菌 

2. 轉(zhuǎn)移15毫升錐形離心管

3. 放進(jìn)4℃臺(tái)式離心機(jī)離心10分鐘,,速度為7000g

4. 小心抽去上清液

5. 加入500微升YIJI裂解液(Reagent A,充分混勻

6. 轉(zhuǎn)移到預(yù)冷的1.5毫升離心管

7. 加入12.5微升YIJI活性液(Reagent B

8. 強(qiáng)力渦旋震蕩15

9. 置于冰槽里15分鐘

10. 放進(jìn)4℃微型臺(tái)式離心機(jī)離心15分鐘,,速度為16000g(或13000RPM,,例如eppendorf 5415

11. 小心移取500微升上清液到新的預(yù)冷的1.5毫升離心管

12. 移取10微升進(jìn)行蛋白定量檢測(cè)(注意:建議使用YIJI Bradford蛋白質(zhì)濃度定量試劑盒-YIJI30030.1

13. 即刻放進(jìn)-70℃保存或置于冰槽里繼續(xù)后續(xù)操作

 

二、 測(cè)讀準(zhǔn)備

 

1.開(kāi)啟分光光度儀預(yù)熱

2.設(shè)定好分光光度儀:溫度37℃,,波長(zhǎng)410nm,,間隔60秒,測(cè)讀6次(共5分鐘),,并置零

3YIJI緩沖液(Reagent C室溫下均衡溫度

 

三,、背景對(duì)照測(cè)定

 

1. 移取880微升YIJI緩沖液(Reagent C到新的比色皿

2. 加入100微升YIJI反應(yīng)液(Reagent D

3. 37溫度下孵育3分鐘

4. 加入20微升YIJI清理液(Reagent A 

5. 上下傾倒數(shù)次,混勻5秒鐘內(nèi))

6. 即刻放進(jìn)分光光度儀檢測(cè),,此為背景空對(duì)照(5分鐘讀數(shù)-0分鐘讀數(shù))

 

四,、樣品測(cè)定

 

1. 移取880微升YIJI緩沖液(Reagent C到新的比色皿

2. 加入100微升YIJI反應(yīng)液(Reagent D

3. 37溫度下孵育3分鐘

4. 加入20微升待測(cè)樣品(注意:建議總量20微克細(xì)胞總蛋白

5. 即刻上下傾倒數(shù)次,,混勻5秒鐘內(nèi))

6. 即刻放進(jìn)分光光度儀檢測(cè),此為樣品讀數(shù)(5分鐘讀數(shù)-0分鐘讀數(shù))   

 

 

五,、 計(jì)算樣品活性

 

【(樣品讀數(shù)-背景讀數(shù))X 1體系容量,;毫升)X樣品稀釋倍數(shù)】÷0.02(樣品容量毫升)X 15.46(毫摩爾吸光系數(shù))X 5反應(yīng)時(shí)間,;分鐘)】=單位/毫升÷(樣品蛋白濃度)毫克/毫升=單位/毫克

 

單位=微摩爾對(duì)硝基苯磷酸/分鐘

 

六,、 酶標(biāo)測(cè)定

 

1. 96孔板上做好相應(yīng)標(biāo)記:背景對(duì)照和樣品

2. 分別移取220微升YIJI緩沖液(Reagent C所有孔里

3. 分別加入25微升YIJI反應(yīng)液(Reagent D所有孔里

4. 37溫度下孵育3分鐘

5. 分別加入5微升YIJI清理液(Reagent A待測(cè)樣品(10微克細(xì)胞總蛋白)到相應(yīng)孔(注意:樣品須清澈

6. 輕輕搖動(dòng)96

7. 即刻放進(jìn)酶標(biāo)儀檢測(cè):0分鐘讀數(shù)和5分鐘讀數(shù)

8. 活性計(jì)算

 

[(樣品讀數(shù)-背景讀數(shù))X樣品稀釋倍數(shù)X 0.25體系容量;毫升)]÷[0.005(樣品容量,;毫升)X 15.46(毫摩爾吸光系數(shù))X 0.6光徑距離,;厘米)X 5反應(yīng)時(shí)間;分鐘)]=單位/毫升÷(樣品蛋白濃度)毫克/毫升=單位/毫克 

 

單位=微摩爾對(duì)硝基苯磷酸/分鐘

 

注意事項(xiàng)

 

1. 本產(chǎn)品為20次(比色皿)或80次(96板)操作,,包括背景對(duì)照

2. 操作時(shí),,須戴手套

3. 樣品避免使用磷酸鹽緩沖溶液EDTA等處理

4. 系統(tǒng)操作過(guò)程中,背景測(cè)定只需1

5. 加入樣品5秒內(nèi)進(jìn)行比色測(cè)定

6. 比色測(cè)定后,,比色皿須清洗*

7. 樣本測(cè)定吸光讀數(shù)升高表明具有酶活性

8. 樣品測(cè)定可以持續(xù)5分鐘,;計(jì)算活性時(shí),可以選擇其中單位時(shí)間(1分鐘)的線性zui大吸光讀數(shù)差值作為樣本讀數(shù)

9. 堿性磷酸酶活性單位濃度定義:在37溫度下,,pH 8.0的情況下,,每單位酶在單位時(shí)間內(nèi)(每分鐘)水解1微摩爾對(duì)硝基苯磷酸

10. 建議待測(cè)樣本總蛋白濃度為1020微克/20微升;如果樣本酶活性過(guò)低或過(guò)高,,則可以增加或降低樣本量(本公司提供YIJI Bradford蛋白質(zhì)濃度定量試劑盒YIJI30030.1

11. 本公司提供系列磷酸化酶學(xué)檢測(cè)試劑產(chǎn)品

 

 

 

 

 

單組份訂購(gòu)信息

 

編號(hào) 名稱(chēng) 規(guī)格

YIJI50050.4 YIJI細(xì)菌堿性磷酸酶活性比色法定量檢測(cè)試劑盒 20

YIJI50050.4A YIJI裂解

 

YIJI細(xì)菌堿性磷酸酶活性比色法定量檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)(中文版)

 

主要用途

 

YIJI細(xì)菌堿性磷酸酶活性比色法定量檢測(cè)試劑是一種旨在通過(guò)底物對(duì)硝基苯磷酸受到堿性磷酸酶的水解,產(chǎn)生有色產(chǎn)物,,在分光光度儀下,,其吸光峰值的變化,即采用比色法定量測(cè)定細(xì)菌樣品中酶活性而經(jīng)典的技術(shù)方法,。該技術(shù)經(jīng)過(guò)精心研制,、成功實(shí)驗(yàn)證明的其適用于各種細(xì)菌菌株(野生或培養(yǎng))裂解樣品堿性磷酸酶的活性檢測(cè),。產(chǎn)品嚴(yán)格無(wú)菌,,即到即用,活體檢測(cè),,操作簡(jiǎn)捷,,性能穩(wěn)定。

 

技術(shù)背景

 

堿性磷酸酶(Alkaline Phophatase,;ALP,;EC3.1.3.1)存在于許多細(xì)菌細(xì)胞中的外周膜結(jié)合性酶,為同源二聚體金屬性酶蛋白,。一旦細(xì)菌的磷濃度過(guò)低,,則誘導(dǎo)堿性磷酸酶的活性,,其功能在于參與細(xì)菌磷代謝。在分子生物學(xué)和免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)和診斷運(yùn)用中,,堿性磷酸酶成為一種重要的工具,。堿性磷酸酶在堿性條件下水解單磷酸?;诘孜?/span>對(duì)硝基苯磷酸p-nitrophenyl phosphate,;PNPP),在堿性磷酸酶催化水解下,,釋放出對(duì)硝基苯酚p-nitrophenol)和磷酸(phosphate),,通過(guò)分光光度儀檢測(cè)對(duì)硝基苯酚(410nm),來(lái)定量測(cè)定堿性磷酸酶的活性,。堿性磷酸酶反應(yīng)系統(tǒng)為:

Alkaline Phophatase

p-nitrophenyl phosphate  +  H2O       p-nitrophenol  +  inorganic phosphate

 

產(chǎn)品內(nèi)容

 

YIJI裂解液(Reagent A)    10毫升

YIJI活性液(Reagent B) 250微升

YIJI緩沖液(Reagent C)  20毫升

YIJI反應(yīng)液(Reagent D)   2毫升

產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)      1份

 

保存方式

 

保存YIJI活性液(Reagent B)在-20冰箱里,,其余的保存在4℃冰箱里;YIJI反應(yīng)液(Reagent D)避免光照,;有效保證3月,;一旦打開(kāi)使用,有效保證12

 

用戶自備

 

1.5毫升離心管:用于樣品保存的容器

15毫升錐形離心管:用于樣品操作的容器

(微型)臺(tái)式離心機(jī):用于樣品制備

比色皿或96孔板:用于比色的容器

分光光度儀或酶標(biāo)儀:用于比色分析

 

 

實(shí)驗(yàn)步驟

 

  • 樣品準(zhǔn)備

 

  • 準(zhǔn)備好10毫升待測(cè)的細(xì)菌 
  • 轉(zhuǎn)移15毫升錐形離心管
  • 放進(jìn)4℃臺(tái)式離心機(jī)離心10分鐘,,速度為7000g
  • 小心抽去上清液
  • 加入500微升YIJI裂解液(Reagent A,,充分混勻
  • 轉(zhuǎn)移到預(yù)冷的1.5毫升離心管
  • 加入12.5微升YIJI活性液(Reagent B
  • 強(qiáng)力渦旋震蕩15
  • 置于冰槽里15分鐘
  • 放進(jìn)4℃微型臺(tái)式離心機(jī)離心15分鐘,速度為16000g(或13000RPM,,例如eppendorf 5415
  • 小心移取500微升上清液到新的預(yù)冷的1.5毫升離心管
  • 移取10微升進(jìn)行蛋白定量檢測(cè)(注意:建議使用YIJI Bradford蛋白質(zhì)濃度定量試劑盒-YIJI30030.1
  • 即刻放進(jìn)-70℃保存或置于冰槽里繼續(xù)后續(xù)操作

 

  • 測(cè)讀準(zhǔn)備

 

1.開(kāi)啟分光光度儀預(yù)熱

2.設(shè)定好分光光度儀:溫度37℃,,波長(zhǎng)410nm,間隔60秒,,測(cè)讀6次(共5分鐘),,并置零

3.YIJI緩沖液(Reagent C室溫下均衡溫度

 

三、背景對(duì)照測(cè)定

 

  • 移取880微升YIJI緩沖液(Reagent C到新的比色皿
  • 加入100微升YIJI反應(yīng)液(Reagent D
  • 在37溫度下孵育3分鐘
  • 加入20微升YIJI清理液(Reagent A 
  • 上下傾倒數(shù)次,,混勻5秒鐘內(nèi))
  • 即刻放進(jìn)分光光度儀檢測(cè),,此為背景空對(duì)照(5分鐘讀數(shù)-0分鐘讀數(shù))

 

四、樣品測(cè)定

 

  • 移取880微升YIJI緩沖液(Reagent C到新的比色皿
  • 加入100微升YIJI反應(yīng)液(Reagent D
  • 在37溫度下孵育3分鐘
  • 加入20微升待測(cè)樣品(注意:建議總量20微克細(xì)胞總蛋白
  • 即刻上下傾倒數(shù)次,,混勻5秒鐘內(nèi))
  • 即刻放進(jìn)分光光度儀檢測(cè),,此為樣品讀數(shù)(5分鐘讀數(shù)-0分鐘讀數(shù))   

 

 

  • 計(jì)算樣品活性

 

【(樣品讀數(shù)-背景讀數(shù))X 1(體系容量;毫升)X樣品稀釋倍數(shù)】÷0.02(樣品容量,;毫升)X 15.46(毫摩爾吸光系數(shù))X 5反應(yīng)時(shí)間,;分鐘)】=單位/毫升÷(樣品蛋白濃度)毫克/毫升=單位/毫克

 

單位=微摩爾對(duì)硝基苯磷酸/分鐘

 

  • 酶標(biāo)測(cè)定

 

  • 96孔板上做好相應(yīng)標(biāo)記:背景對(duì)照和樣品
  • 分別移取220微升YIJI緩沖液(Reagent C所有孔里
  • 分別加入25微升YIJI反應(yīng)液(Reagent D所有孔里
  • 在37溫度下孵育3分鐘
  • 分別加入5微升YIJI清理液(Reagent A)待測(cè)樣品(10微克細(xì)胞總蛋白)到相應(yīng)孔(注意:樣品須清澈
  • 輕輕搖動(dòng)96孔
  • 即刻放進(jìn)酶標(biāo)儀檢測(cè):0分鐘讀數(shù)和5分鐘讀數(shù)
  • 活性計(jì)算

 

[(樣品讀數(shù)-背景讀數(shù))X樣品稀釋倍數(shù)X 0.25體系容量;毫升)]÷[0.005(樣品容量,;毫升)X 15.46(毫摩爾吸光系數(shù))X 0.6光徑距離,;厘米)X 5反應(yīng)時(shí)間;分鐘)]=單位/毫升÷(樣品蛋白濃度)毫克/毫升=單位/毫克 

 

單位=微摩爾對(duì)硝基苯磷酸/分鐘

 

注意事項(xiàng)

 

  • 本產(chǎn)品為20次(比色皿)或80次(96孔板)操作,,包括背景對(duì)照
  • 操作時(shí),,須戴手套
  • 樣品避免使用磷酸鹽緩沖溶液和EDTA等處理
  • 系統(tǒng)操作過(guò)程中,,背景測(cè)定只需1
  • 加入樣品后5秒內(nèi)進(jìn)行比色測(cè)定
  • 比色測(cè)定后,比色皿須清洗*
  • 樣本測(cè)定吸光讀數(shù)升高表明具有酶活性
  • 樣品測(cè)定可以持續(xù)5分鐘,;計(jì)算活性時(shí),,可以選擇其中單位時(shí)間(1分鐘)的線性zui大吸光讀數(shù)差值作為樣本讀數(shù)
  • 堿性磷酸酶活性單位濃度定義:在37溫度下,pH 8.0的情況下,,每單位酶在單位時(shí)間內(nèi)(每分鐘)水解1微摩爾對(duì)硝基苯磷酸
  • 建議待測(cè)樣本總蛋白濃度為10至20微克/20微升,;如果樣本酶活性過(guò)低或過(guò)高,則可以增加或降低樣本量(本公司提供YIJI Bradford蛋白質(zhì)濃度定量試劑盒YIJI30030.1)
  • 本公司提供系列磷酸化酶學(xué)檢測(cè)試劑產(chǎn)品

 

 

 

 

 

單組份訂購(gòu)信息

 

編號(hào) 名稱(chēng) 規(guī)格

YIJI50050.4 YIJI細(xì)菌堿性磷酸酶活性比色法定量檢測(cè)試劑盒 20

YIJI50050.4A YIJI裂解液(Reagent A     50毫升

YIJI50050.4B YIJI活性液(Reagent B      1毫升

YIJI50050.4C YIJI緩沖液(Reagent C     100毫升

YIJI50050.4D YIJI反應(yīng)液(Reagent D      50毫升

YIJI30030.1 YIJI Bradford蛋白質(zhì)濃度定量試劑盒 100次

 

 

液(Reagent A     50毫升

YIJI50050.4B YIJI活性液(Reagent B      1毫升

YIJI50050.4C YIJI緩沖液(Reagent C     100毫升

YIJI50050.4D YIJI反應(yīng)液(Reagent D      50毫升

YIJI30030.1 YIJI Bradford蛋白質(zhì)濃度定量試劑盒 100

 

 

 

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