微分干涉顯微鏡的原理
1952年,,Nomarski在相差顯微鏡原理的基礎(chǔ)上發(fā)明了微分干涉差顯微鏡(differential interference contrast microscope),,簡稱:DIC,。
DIC顯微鏡又稱Nomarski相差顯微鏡(Nomarki contrast microscope),,其優(yōu)點(diǎn)是能顯示結(jié)構(gòu)的三維立體投影影像,。與相差顯微鏡相比,,其標(biāo)本可略厚一點(diǎn),折射率差別更大,,故影像的立體感更強(qiáng),。
DIC顯微鏡的物理原理*不同于相差顯微鏡,技術(shù)設(shè)計(jì)要復(fù)雜得多,。DIC利用的是偏振光,,有四個(gè)特殊的光學(xué)組件:偏振器(polarizer)、DIC棱鏡,、DIC滑行器和檢偏器(analyzer),。偏振器直接裝在聚光系統(tǒng)的前面,使光線發(fā)生線性偏振,。在聚光器中則安裝了石英Wollaston棱鏡,,即DIC棱鏡,此棱鏡可將一束光分解成偏振方向不同的兩束光(x和y),,二者成一小夾角,。聚光器將兩束光調(diào)整成與顯微鏡光軸平行的方向。zui初兩束光相位一致,,在穿過標(biāo)本相鄰的區(qū)域后,,由于標(biāo)本的厚度和折射率不同,引起了兩束光發(fā)生了光程差,。在物鏡的后焦面處安裝了第二個(gè)Wollaston棱鏡,,即DIC滑行器,它把兩束光波合并成一束,。這時(shí)兩束光的偏振面(x和y)仍然存在,。zui后光束穿過第二個(gè)偏振裝置,,即檢偏器。在光束形成目鏡DIC影像之前,,檢偏器與偏光器的方向成直角,。檢偏器將兩束垂直的光波組合成具有相同偏振面的兩束光,從而使二者發(fā)生干涉,。x和y波的光程差決定著透光的多少,。光程差值為0時(shí),沒有光穿過檢偏器,;光程差值等于波長一半時(shí),,穿過的光達(dá)到zui大值。于是在灰色的背景上,,標(biāo)本結(jié)構(gòu)呈現(xiàn)出亮暗差,。為了使影像的反差達(dá)到*狀態(tài),可通過調(diào)節(jié)DIC滑行器的縱行微調(diào)來改變光程差,,光程差可改變影像的亮度。調(diào)節(jié)DIC滑行器可使標(biāo)本的細(xì)微結(jié)構(gòu)呈現(xiàn)出正或負(fù)的投影形象,,通常是一側(cè)亮,,而另一側(cè)暗,這便造成了標(biāo)本的人為三維立體感,,類似大理石上的浮雕,。
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