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液相色譜柱的使用及保養(yǎng)
閱讀：3876 發(fā)布時間：2012-9-5
液相色譜柱使用及保養(yǎng)
液相色譜儀由高壓液體泵,、檢測器及液相色譜柱等三部分組成，其中液相色譜柱的正確安裝和使用,，是液相色譜工作的關(guān)鍵,；也是液相色譜工作者獲得正確可靠的實驗數(shù)據(jù)的必經(jīng)之路。
一,、液相色譜柱的安裝：
1,、液相色譜柱的結(jié)構(gòu)：
a、空柱由柱接頭,、柱管及濾片組裝而成,。
柱接頭采用低死體積結(jié)構(gòu),，柱接頭是兩端螺紋組件，一端是為7/16英寸外螺紋,，另一端是3／16英寸的內(nèi)螺紋（國內(nèi)外已規(guī)范化）,。7／16英寸外螺紋與1／4英寸柱管（Φ6.35mm）連接，中間放置壓壞用于密封,。3／16英寸的內(nèi)螺紋與1／16英寸（Φ1.57mm）的連接管連接,，中間也放置壓環(huán)用于柱接頭的密封。為了盡量減少柱外死體積,，在安裝色譜柱時,，用Φ1.57mm連接管通過空心螺釘壓環(huán)后要盡量插到底，然后再擰緊空心螺釘,。壓環(huán)被空心螺釘擠壓變形后緊箍在連接管上（連接管通過壓環(huán)后露出的管長度應(yīng)嚴(yán)格控制在2．5mm長或其他固定尺寸）,。
在兩端柱接頭內(nèi)，柱管兩端各放置一片不銹鋼濾片（或濾網(wǎng)）,，用于封堵柱填料不被流動相沖出柱外而流失,。空柱各組件均為316#不銹鋼材質(zhì),，能耐受一般的溶劑作用,。但由于含氯化物的溶劑對其有一定的腐蝕性，故使用時要注意,，柱及連接管內(nèi)不能長時間存留此類溶劑,，以避免腐蝕。
b,、柱填料：
液相色譜柱的分離作用是在填料與流動相之間進(jìn)行的,，柱子的分類是依據(jù)填料類型而定。
正相柱：多以硅膠為柱填料,。根據(jù)外型可分為無定型和球型兩種,，其顆粒直徑在3—10μm的范圍內(nèi)。另一類正相填料是硅膠表面鍵合—CN,，-NH2等官能團(tuán)即所謂的鍵合相硅膠,。
反相柱：主要是以硅膠為基質(zhì)，在其表面鍵合十八烷基官能團(tuán)（ODS）的非極性填料,。也有無定型和球型之分,。
常用的其他的反相填料還有鍵合C8、C4,、C2,、苯基等，其顆粒粒徑在3—10μm之間,。
2,，色譜柱的安裝：
a,、拆開柱包裝盒，確認(rèn)色譜柱的類型,、尺寸,、出廠日期以及柱內(nèi)貯存的溶劑。
b,、擰下柱兩端接頭的密封堵頭放回包裝盒供備用,。
c、按柱管上標(biāo)示的流動相流向,，將色譜柱的入口端通過連接管與進(jìn)樣閥出口相連接（如條件允許,，建議在柱前使用保護(hù)柱）；柱的出口與檢測器連接,。連接管是外徑為1.57mm、內(nèi)徑為0.1-0.3mm的不銹鋼管,。連接管的兩端均有空心螺釘及密封用壓環(huán),。在接管時一定要設(shè)法降低柱外死體積。連接管通過空心螺釘,、壓環(huán)后盡量用力插到底,，然后順時針擰緊空心螺釘，直到擰不動為止,，再用扳手繼續(xù)順時針擰1／4-1／2圈,，切記不要用力過大。如色譜柱通過流動相加壓后有漏液現(xiàn)象,，請用扳手繼續(xù)順時針擰1／4圈,，直至不漏液為止。
二,、液相色譜柱的使用：
色譜柱在使用前,，進(jìn)行柱的性能測試，并將結(jié)果保存起來,，作為今后評價柱性能變化的參考,。但要注意：柱性能可能由于所使用的樣品、流動相,、柱溫等條件的差異而有所不同,；另外，在做柱性能測試時是按照色譜柱出廠報告中的條件進(jìn)行（出廠測試所使用的條件是*條件）,，只有這樣,，測得的結(jié)果才有可比性。
1,、樣品的前處理：
a,、使用流動相溶解樣品,。
b、使用予處理柱除去樣品中的強(qiáng)極性或與柱填料產(chǎn)生不可逆吸附的雜質(zhì),。
c,、使用0.45μm的過濾膜過濾除去微粒雜質(zhì)。
2,、流動相的配制：
液相色譜是樣品組分在柱填料與流動相之間質(zhì)量交換而達(dá)到分離的目的,，因此要求流動相具備以下的特點：
a、流動相對樣品具有一定的溶解能力,，保證樣品組分不會沉淀在柱中（或長時間保留在柱中）,。
b、流動相具有一定惰性,，與樣品不產(chǎn)生化學(xué)反應(yīng)（特殊情況除外）,。
c、流動相的黏度要盡量小,，以便在使用較長的分析柱時能得到好的分離效果,；同時降低柱壓降，延長液體泵的使用壽命（可運用提高溫度的方法降低流動相的黏度）,。
d,、流動相的物化性質(zhì)要與使用的檢測器相適應(yīng)。如使用UV檢測器,，使用對紫外吸收較低的溶劑配制,。
e、流動相沸點不要太低,，否則容易產(chǎn)生氣泡,，導(dǎo)致實驗無法進(jìn)行。
f,、在流動相配制好后,，一定要進(jìn)行脫氣。除去溶解在流動相中的微量氣體既有利于檢測,，還可以防止流動相中的微量氧與樣品發(fā)生作用,。
3、流動相流速的選擇：
因柱效是柱中流動相線性流速的函數(shù),，使用不同的流速可得到不同的柱效,。對于一根特定的色譜柱，要追求*柱效,，使用*流速,。對內(nèi)徑為4.6mm的色譜柱，流速一般選擇1ml／min,，對于內(nèi)徑為4.0mm柱,，流速0.8ml／min為佳,。
當(dāng)選用*流速時，分析時間可能延長,?？刹捎酶淖兞鲃酉嗟南礈鞆?qiáng)度的方法以縮短分析時間（如使用反相柱時，可適當(dāng)增加甲醇或乙腈的含量）,。
注意：
a．由于甲醇廉價,，對于反相柱推薦使用甲醇體系（必須使用乙腈的場合除外）。
b．對于正相柱推薦使用沸程為30-60℃的石油醚或提純后的己烷作流動相,，沒有提純的己烷不得使用,。用水使用超純水（電阻率大于18兆歐），去離子水及雙蒸水中含有酚類雜質(zhì),，有可能影響分析結(jié)果,。
c．含水流動相zui奸在實驗前配制，尤其是夏天使用緩沖溶液作為流動相不要過夜,。加入*,，防止細(xì)菌生長。
d．流動相要求使用0.45μm濾膜過濾,，除去微粒雜質(zhì)。
e．使用HPLC級溶劑配制流動相,，使用合適的流動相可延長色譜柱的使用壽命,，提高柱性能。
4,、柱性能測試：
啟動液相色譜儀：a,、流動相流速設(shè)定為1ml／min。
b,、UV檢測器波長設(shè)定為254nm,。
使用出廠測試時使用的流動相組成及測試樣品。
記錄并計算測試結(jié)果,。
*參考（標(biāo)準(zhǔn)JB5226-91）液相色譜儀測試用標(biāo)準(zhǔn)色譜柱,。
液相色譜儀由高壓液體泵,、檢測器及液相色譜柱等三部分組成，其中液相色譜柱的正確安裝和使用,，是液相色譜工作的關(guān)鍵,；也是液相色譜工作者獲得正確可靠的實驗數(shù)據(jù)的必經(jīng)之路。
一,、液相色譜柱的安裝：
1,、液相色譜柱的結(jié)構(gòu)：
a、空柱由柱接頭,、柱管及濾片組裝而成,。
柱接頭采用低死體積結(jié)構(gòu),，柱接頭是兩端螺紋組件，一端是為7/16英寸外螺紋,，另一端是3／16英寸的內(nèi)螺紋（國內(nèi)外已規(guī)范化）,。7／16英寸外螺紋與1／4英寸柱管（Φ6.35mm）連接，中間放置壓壞用于密封,。3／16英寸的內(nèi)螺紋與1／16英寸（Φ1.57mm）的連接管連接,，中間也放置壓環(huán)用于柱接頭的密封。為了盡量減少柱外死體積,，在安裝色譜柱時,，用Φ1.57mm連接管通過空心螺釘壓環(huán)后要盡量插到底，然后再擰緊空心螺釘,。壓環(huán)被空心螺釘擠壓變形后緊箍在連接管上（連接管通過壓環(huán)后露出的管長度應(yīng)嚴(yán)格控制在2．5mm長或其他固定尺寸）,。
在兩端柱接頭內(nèi)，柱管兩端各放置一片不銹鋼濾片（或濾網(wǎng)）,，用于封堵柱填料不被流動相沖出柱外而流失,。空柱各組件均為316#不銹鋼材質(zhì),，能耐受一般的溶劑作用,。但由于含氯化物的溶劑對其有一定的腐蝕性，故使用時要注意,，柱及連接管內(nèi)不能長時間存留此類溶劑,，以避免腐蝕。
b,、柱填料：
液相色譜柱的分離作用是在填料與流動相之間進(jìn)行的,，柱子的分類是依據(jù)填料類型而定。
正相柱：多以硅膠為柱填料,。根據(jù)外型可分為無定型和球型兩種,，其顆粒直徑在3—10μm的范圍內(nèi)。另一類正相填料是硅膠表面鍵合—CN,，-NH2等官能團(tuán)即所謂的鍵合相硅膠,。
反相柱：主要是以硅膠為基質(zhì)，在其表面鍵合十八烷基官能團(tuán)（ODS）的非極性填料,。也有無定型和球型之分,。
常用的其他的反相填料還有鍵合C8、C4,、C2,、苯基等，其顆粒粒徑在3—10μm之間,。
2,，色譜柱的安裝：
a,、拆開柱包裝盒，確認(rèn)色譜柱的類型,、尺寸,、出廠日期以及柱內(nèi)貯存的溶劑。
b,、擰下柱兩端接頭的密封堵頭放回包裝盒供備用,。
c、按柱管上標(biāo)示的流動相流向,，將色譜柱的入口端通過連接管與進(jìn)樣閥出口相連接（如條件允許,，建議在柱前使用保護(hù)柱）；柱的出口與檢測器連接,。連接管是外徑為1.57mm、內(nèi)徑為0.1-0.3mm的不銹鋼管,。連接管的兩端均有空心螺釘及密封用壓環(huán),。在接管時一定要設(shè)法降低柱外死體積。連接管通過空心螺釘,、壓環(huán)后盡量用力插到底,，然后順時針擰緊空心螺釘，直到擰不動為止,，再用扳手繼續(xù)順時針擰1／4-1／2圈,，切記不要用力過大。如色譜柱通過流動相加壓后有漏液現(xiàn)象,，請用扳手繼續(xù)順時針擰1／4圈,，直至不漏液為止。
二,、液相色譜柱的使用：
色譜柱在使用前,，進(jìn)行柱的性能測試，并將結(jié)果保存起來,，作為今后評價柱性能變化的參考,。但要注意：柱性能可能由于所使用的樣品、流動相,、柱溫等條件的差異而有所不同,；另外，在做柱性能測試時是按照色譜柱出廠報告中的條件進(jìn)行（出廠測試所使用的條件是*條件）,，只有這樣,，測得的結(jié)果才有可比性。
1,、樣品的前處理：
a,、使用流動相溶解樣品,。
b、使用予處理柱除去樣品中的強(qiáng)極性或與柱填料產(chǎn)生不可逆吸附的雜質(zhì),。
c,、使用0.45μm的過濾膜過濾除去微粒雜質(zhì)。
2,、流動相的配制：
液相色譜是樣品組分在柱填料與流動相之間質(zhì)量交換而達(dá)到分離的目的,，因此要求流動相具備以下的特點：
a、流動相對樣品具有一定的溶解能力,，保證樣品組分不會沉淀在柱中（或長時間保留在柱中）,。
b、流動相具有一定惰性,，與樣品不產(chǎn)生化學(xué)反應(yīng)（特殊情況除外）,。
c、流動相的黏度要盡量小,，以便在使用較長的分析柱時能得到好的分離效果,；同時降低柱壓降，延長液體泵的使用壽命（可運用提高溫度的方法降低流動相的黏度）,。
d,、流動相的物化性質(zhì)要與使用的檢測器相適應(yīng)。如使用UV檢測器,，使用對紫外吸收較低的溶劑配制,。
e、流動相沸點不要太低,，否則容易產(chǎn)生氣泡,，導(dǎo)致實驗無法進(jìn)行。
f,、在流動相配制好后,，一定要進(jìn)行脫氣。除去溶解在流動相中的微量氣體既有利于檢測,，還可以防止流動相中的微量氧與樣品發(fā)生作用,。
3、流動相流速的選擇：
因柱效是柱中流動相線性流速的函數(shù),，使用不同的流速可得到不同的柱效,。對于一根特定的色譜柱，要追求*柱效,，使用*流速,。對內(nèi)徑為4.6mm的色譜柱，流速一般選擇1ml／min,，對于內(nèi)徑為4.0mm柱,，流速0.8ml／min為佳,。
當(dāng)選用*流速時，分析時間可能延長,?？刹捎酶淖兞鲃酉嗟南礈鞆?qiáng)度的方法以縮短分析時間（如使用反相柱時，可適當(dāng)增加甲醇或乙腈的含量）,。
注意：
a．由于甲醇廉價,，對于反相柱推薦使用甲醇體系（必須使用乙腈的場合除外）。
b．對于正相柱推薦使用沸程為30-60℃的石油醚或提純后的己烷作流動相,，沒有提純的己烷不得使用,。用水使用超純水（電阻率大于18兆歐），去離子水及雙蒸水中含有酚類雜質(zhì),，有可能影響分析結(jié)果,。
c．含水流動相zui奸在實驗前配制，尤其是夏天使用緩沖溶液作為流動相不要過夜,。加入*,，防止細(xì)菌生長。
d．流動相要求使用0.45μm濾膜過濾,，除去微粒雜質(zhì)。
e．使用HPLC級溶劑配制流動相,，使用合適的流動相可延長色譜柱的使用壽命,，提高柱性能。
4,、柱性能測試：
啟動液相色譜儀：a,、流動相流速設(shè)定為1ml／min。
b,、UV檢測器波長設(shè)定為254nm,。
使用出廠測試時使用的流動相組成及測試樣品。
記錄并計算測試結(jié)果,。
*參考（標(biāo)準(zhǔn)JB5226-91）液相色譜儀測試用標(biāo)準(zhǔn)色譜柱,。