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上海凱朗儀器設(shè)備廠
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生化培養(yǎng)箱在多管發(fā)酵法注意事項
2012-9-27 閱讀(1503)
| 提 供 商 | 上海凱朗儀器設(shè)備廠 | 資料大小 | 23.3KB |
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生化培養(yǎng)箱在多管發(fā)酵法注意事項
1．加氯水樣的處理 經(jīng)氯處理消毒過的水樣，水中含有一定量的余氯,，使大腸菌群處于受損或受抑制狀態(tài),，在采集水樣時應(yīng)提前在采樣瓶中加硫代硫酸鈉，硫代硫酸鈉可以脫氯,，使受損的細(xì)菌得以復(fù)蘇與修復(fù),，從而避免出現(xiàn)計數(shù)結(jié)果偏低甚至假陰性的現(xiàn)象。此外余氯對濾膜法培養(yǎng)的細(xì)菌其抑制作用尤為明顯,，所以抽濾時應(yīng)對水樣進(jìn)行大量無菌水稀釋,，以減少余氯的殘留。
2．培養(yǎng)溫度的要求 總大腸菌群中的細(xì)菌除生活在腸道中外,，在自然環(huán)境中的水與土壤中也經(jīng)常存在,，但此等在自然環(huán)境中生活的大腸菌群培養(yǎng)的zui合適溫度為25℃左右，如在37℃培養(yǎng)則仍可生長,，但如將培養(yǎng)溫度再升高至44．5℃,，則不再生長，而直接來自糞便的大腸菌群細(xì)菌,，習(xí)慣于37℃左右生長,，如將培養(yǎng)溫度升高至44．5℃仍可繼續(xù)生長。因此,，可用提高培養(yǎng)溫度的方法將自然環(huán)境中的大腸菌群與糞便中的大腸菌群區(qū)分,，兩種方法也都基于此理。將接種好的樣品或裝有濾膜的培養(yǎng)基放入生化培養(yǎng)箱時,，箱內(nèi)溫度一定要達(dá)到所要求的溫度（44.5±0.5℃）時,，方可放入。如用恒溫水浴箱時,，其水面要高于接種物面,，放濾膜的培養(yǎng)皿要沉到水浴箱底部。
3．培養(yǎng)物質(zhì)的制備與保存
⑴.多管發(fā)酵法所使用的培養(yǎng)液在分裝于各發(fā)酵管中后,，應(yīng)將發(fā)酵管盡快放于高壓蒸汽滅菌器中,，在115℃滅菌20min（注意：這個溫度也應(yīng)控制好，既達(dá)到滅菌的作用,，還要防止培養(yǎng)物質(zhì)分解流失）,，然后貯存于冰箱或暗處備用。
⑵.濾膜法所采用的M-FC培養(yǎng)基多使用外購的成品,，培養(yǎng)基中苯胺藍(lán)的純度和質(zhì)量往往影響菌落的顏色,，因此，無菌包裝的成套培養(yǎng)基在使用前,，先接種典型糞大腸菌,，以觀察對比菌落的顏色，來鑒定其穩(wěn)定性。
4．樣品的保存 采樣用的容器使用前應(yīng)蓋好瓶蓋,，用牛皮紙將瓶蓋和瓶頸處包裹好,，置干燥箱160℃-170℃干熱滅菌2h，或用高壓蒸汽滅菌器121℃滅菌15min,。采樣后水樣的正確保存也很重要,，如保存不當(dāng)可使樣品中的大腸菌群細(xì)菌死亡或在一定條件下再生長，這些都將影響檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性,。檢測室接到水樣后,，應(yīng)立即檢測，如因故不能檢測時,，應(yīng)立即將樣品置于冰箱內(nèi)（2℃-10℃）并于2小時內(nèi)檢測,。
5．結(jié)果統(tǒng)計
⑴.多管發(fā)酵法的結(jié)果是根據(jù)不同接種量的發(fā)酵管所出現(xiàn)陽性結(jié)果的數(shù)目，從MPN表中查得相應(yīng)的MPN指數(shù),，來計算每升水中糞大腸菌群細(xì)菌的MPN值,。MPN是“Most Probable Number”的縮寫，指zui大可能數(shù),，它是根據(jù)統(tǒng)計學(xué)理論,，估計水體中的菌群密度和衛(wèi)生質(zhì)量的一種方法，所以準(zhǔn)確判斷不同接種量發(fā)酵管的陽性數(shù)是非常重要的,，否則將導(dǎo)致較大偏差。
⑵.濾膜法的結(jié)果是計數(shù)濾膜上呈藍(lán)或藍(lán)綠色的菌落,，來計算出每升水樣中的糞大腸菌群數(shù),。所以為便于計數(shù)，減少誤差,，理想的水樣體積是一片濾膜上生長20-60個糞大腸菌群菌落,。
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