保存時間漂移的幾種zui常見的原因
保存時間不重現(xiàn)有兩種不同的情況：即保存時間漂移和保存時間波動,。前者是指保存時間僅沿單方向發(fā)生變化,，而后者指保存時間無固定規(guī)律的波動。將此兩種情況區(qū)分開來對找到題目的原因往往很有幫助,。如,，保存時間的漂移往往由柱老化引起；而柱老化不可能引起保存時間的無規(guī)律波動,。事實上,，保存時間漂移的多半原因是不同機理的色譜柱老化，如固定相流失（例如通過水解）,，色譜柱污染（由樣品或活動相所致）等,。保存時間漂移的幾種zui常見的原因如下：
一色譜柱平衡
假如我們觀察到保存時間漂移，首先應考慮色譜柱是否已用活動相*平衡,。通常平衡需要10-20個柱體積的活動相,，但假如在活動相中加進少量添加劑（如離子對試劑）則需要相當長的時間來平衡色譜柱。 酸堿度計| 電導計| 水分測定儀| 濁度計| 色度計| 粘度計| 折射計| 滴定儀| 密度計| 熱流計| 濃度計| 折射儀| 采樣儀|
活動相污染也可能是原因之一,。溶于活動相中的少量污染物可能慢慢富集到色譜柱上,，從而造成保存時間的漂移。應留意：水是很輕易污染的活動相成分,。
二固定相穩(wěn)定性
固定相的穩(wěn)定性都是有限的,，即使在推薦的PH范圍內使用，固定相也會慢慢水解,。例如,，硅膠基質在pH4時水解穩(wěn)定性。水解速度與活動相類型和配體有關,。雙官能團配體和三官能團配體比單官能團配體的鍵合相要穩(wěn)定,；長鏈鍵合相比短鏈鍵合相穩(wěn)定；烷基鍵合相比氰基鍵合相穩(wěn)定的多,。
經常清洗色譜柱亦會加速色譜柱固定相的水解,。其他硅膠基質鍵合相在水溶液環(huán)境中也可以發(fā)生水解,，如氨基鍵合相等。
三色譜柱污染
保存時間漂移的另一個常見原因是色譜柱污染,。HPLC色譜柱是非常有效的吸附性過濾器,，它可以過濾并吸附活動相攜帶的任何物質。污染源可以是：活動相本身,，活動相容器,，連接管、泵,、進樣器和儀器密封墊,，以及樣品等。通常通過實驗可判定污染的來源,。
樣品中假如存在色譜柱上保存很強的組分,，就可能是使保存時間漂移的潛伏根源。這些根源通常是樣品基質,。如：配藥中的賦形劑,，生化樣品（如血清）中的蛋白及類脂類化合物，食品樣品中的淀粉,，環(huán)境水樣中的腐殖酸等,。通常樣品中的強保存組分具有較高的分子量，在此情況下,，保存時間漂移的同時或其后會有反壓的增加,。可以通過使用固相提?。⊿PE）等樣品前處理方法來往除樣品基質的影響,。
避免色譜柱污染zui簡單的方法是防患于未然,。相比之下,，找到題目的所在并設計有效的清洗步驟以往除污染物要困難的多。廣州市駿凱電子科技有限公司通常使用在給定色譜條件下的強溶劑,，但并非所有污染物都可以在活動相中溶解,。如THF可往除反相色譜柱中的很多污染物，但蛋白在THF中就不能溶解,。DMSO經常用于往除反相色譜柱中的蛋白,。
使用保護柱是個非常有效的方法。反沖色譜柱僅是不得已時采用的辦法,。
四活動相組成
活動相組成的緩慢變化也是保存時間漂移的常見原因,。如活動相中易揮發(fā)組分的揮發(fā)及循環(huán)使用活動相等。
五疏水坍塌
當小孔徑,、端基封口良好的反相填料色譜柱使用接近100%的水為活動相時,，有時會發(fā)生分離忽然喪失及被分析物質保存明顯降低或*不保存的現(xiàn)象,，這就是疏水坍塌。此現(xiàn)象是由活動相不浸潤固定相表面而致,。拯救的辦法實現(xiàn)用含大量有機組分的活動相浸潤固定相,，再用高水含量的活動相進行平衡。由是色譜柱長期儲存也會發(fā)生此現(xiàn)象,。使用內嵌極性基團的反相色譜柱（如Waters SymmetryShield RP色譜柱）或非端基封口的色譜柱（如Waters Resolve色譜柱）也可避免發(fā)生坍塌,。
