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產(chǎn)品簡介
“人MAPKAPK3 ELISA試劑盒"Elisa試驗是一種敏感性高,，特異性強，重復性好的實驗診斷方法,。有96T/48T包裝規(guī)格,，價格實惠，質(zhì)量穩(wěn)定,，歡迎新老客戶來電來涵,。
詳細介紹
elisa檢測 elisa實驗 MAPKAPK3
產(chǎn)品名稱：人MAPKAPK3 ELISA試劑盒
產(chǎn)品別名：人促分裂素原活化蛋白激酶激活的蛋白激酶3 ELISA試劑盒
英文名稱：Human mitogen-activated protein kinase-activated protein kinase 3,MAPKAPK3 ELISA KIT
產(chǎn)品規(guī)格：48T/96T
檢測方法：ELISA酶聯(lián)免疫
待檢樣本：體液,，血清，血漿,，細胞培養(yǎng)上清液,，尿液，組織勻漿,心房水標本等等,。
保存條件：2-8℃
【金標法操作檢測方法原理】
氯化金分子在還原劑作用下聚合形成金顆粒,，顆粒與顆粒之間因靜電作用而相互排斥，使其保持一個比較穩(wěn)定的膠體狀態(tài),，故稱作膠體金,。利用膠體金顆粒的高電子密度及其表面能結(jié)合生物大分子（如抗體、SPA,、植物血凝素和刀豆蛋白A 等）以 及具有一定顏色等特性,，可用光鏡和電鏡對細胞內(nèi)抗原進行定位、定性的研究,。
【金標法操作檢測方法方法學分類】
1. 班點金免疫滲濾試驗 固相膜免疫測定中液體在微孔膜中穿過流出呈穿流形式,，為斑點金免疫滲濾試驗（dot immunogold filtration assay，DIGFA）,，亦有稱免疫金溶膠斑點法,、滴金免疫測定法等。試驗單位為三層反應盒,，*層為過濾器（濾紙層）,，第二層為反應膜（NC 膜或MC 膜）上點加有特異性抗原或抗體，第三層為吸水墊料,，有稱此滲濾裝置為滴金反應板,。
以雙抗體夾心法測dsDNA 為例：試驗中將標本加在反應盒上，血清（標本）透過過濾層進入反應層,，反應層上點有“一”字形抗IgG（或某種人血清蛋白作為試驗陽性對照）及“．”形被測物相應抗體，血清中抗原與反應層中抗體結(jié)合,，其余無關(guān)蛋白等濾出膜片,，加入金標記抗體試劑，反應膜上“一”字形及“．”形均顯紅色為試驗陽性,，僅“一”形顯紅色為試驗陰性（試劑盒狀態(tài)良好）,，“一”不顯色提示試劑盒質(zhì)量不合格，需另取反應盒重做試驗,。試劑盒基本試劑成分有滴金反應板,、金標記試劑及洗滌液。
2. 斑點金免疫層析試驗 固相膜免疫測定中液體通過毛細管作用在膜上向前移行呈橫流形式,，為斑點金免疫層析試驗（dotimmunogoldchromatographyassay,，DIGCA）,。試驗單位為一濾膜條，自上而下分有多個層次,。
如單克隆雙抗體法測HCG,，濾膜條各區(qū)域分別為：吸水濾紙—固定有金標二抗的MC 膜—固定有抗β-HCG 抗體的MC 膜—金標記抗。α-HCG 玻璃纖維—吸尿玻璃纖維,。試驗中將濾膜條浸入被測尿液或滴加尿液,，尿液在毛細管作用下向試紙條上端緩緩移行，尿液將金標抗,。α-HCG 溶解并帶動它向前移動,，結(jié)合尿中HCG 至抗β-HCG 抗體處形成復合物，并在抗β-HCG 抗體固定處顯示膠體金*紅色,，提示試驗陽性,。尿中無HCG時，溶解的抗α-HCG 至固定有金標二抗的MC膜處顯示膠體金*紅色（質(zhì)控線條）,，提示試驗陰性,。
試劑盒基本單位僅有一濾膜條，只有一步操作,。
3. 膠體金顆粒的制備
在氯化金溶液中加入不同的還原劑,，可制備出不同大小的金顆粒。常采用檸檬酸,、抗壞血酸和白磷,。用這三種還原劑可分別制備出大、中,、小三種主要膠體金顆粒,。目前，有更多的實驗室僅以檸檬酸為還原劑,，在檸檬酸還原氯化金時,，加入不同量的單寧酸即可獲得大小不同的金顆粒，所制備金顆粒的大小非常*,。
[1] 以抗壞血酸為還原劑制備10～15nm 直徑的膠體金（Au l5） 在一個洗凈烤干的250 ml 容量的三角燒瓶中,，加入20ml 三蒸去離子水（3DW）、l ml 0.1 mol/L K2CO3和l ml％氯化金水溶液于冰浴中混勻,，立即加入l ml 0.7％ 抗壞血酸,，并充分搖動至溶液呈紫紅色，加3DW 至100ml,，100℃水浴5min 后,，溶液變成紅色，放室溫冷卻待用。
[2] 以檸檬酸為還原劑制備8～10 nm 直徑的膠體金（Au l0） 125 ml 3 DW 煮沸后加入1％ 檸檬酸7.5 ml,，再煮沸5 min,，迅速加入1.25 ml％氯化金溶液，100℃水浴15 min,，溶液置室溫待用,。
[3] 以檸檬酸為還原劑制備5—6 nm 直徑膠體金（Au 6） 將l ml 氯化金加入100ml 3DW 中煮沸，快速加進2．45ml 檸檬酸—單寧酸的混合液（2 ml 1％ 檸檬酸三鈉,、0.45 ml 1％ 單寧酸）,，繼續(xù)煮沸5 min，放室溫待用,。
[4] 白磷為還原劑制備5 nm 直徑的膠體金（Au 5） 將120 ml 3DW,、1.5 ml％氯化金和2.7 ml 1 mol/L K2CO3，混合,，緩慢攪拌中快速加進l ml 白磷一乙醚溶液,，室溫輕攪拌15 min，100℃水浴30 min 后放室溫待用,。
膠體金制備一般需在中性pH（7.2 左右）條件下進行,，也可在稍偏酸或稍偏堿的環(huán)境中進行。制備的膠體金其大小和形狀可在電鏡下觀察確定,。一般膠體金溶液呈紅葡萄酒顏色,，大顆粒膠體金是紫紅色。正常情況下,，膠體金溶液應清澈而不含任何可見的沉淀或漂浮物,，如溶液、試劑,、瓶皿等不干凈,。將造成如下結(jié)果：
*不能獲得預期大小的膠體金顆粒，第二將影響到下一步生物大分子的吸附過程和包被后膠體金的穩(wěn)定性,。因此,，為了獲得滿意的膠體金，應選擇zui純凈的各有關(guān)試劑和液體,。如有條件,，所有試劑經(jīng)過超過濾處理，以除去其中的分子聚合體和可能混入的雜質(zhì)塊,。制備過程中所用的水以三蒸去離子水zui合適，各類
器皿均應嚴格清洗,，盛膠體金的瓶皿先經(jīng)過硅化則更為理想,。膠體金顆粒在吸附生物大分子之前具有一定的穩(wěn)定性，4℃可存放一周左右,，如果經(jīng)超過濾和透析處理后加0.002％ 疊氮鈉,，能保存5 個月左右,。
4. 膠體金和生物大分子的結(jié)合
任何蛋白質(zhì)都能結(jié)合到膠體金顆粒表面，膠體金和蛋白質(zhì)結(jié)合后,，并不影響蛋白質(zhì)的反應性,。
[1]生物大分子的準備 鹽類成分能影響膠體金的吸附能力，并使膠體金顆粒發(fā)生聚集,，因此,，生物大分子在包被金顆粒前，常需透析,，使溶液無鹽或鹽的濃度極低,，常用的透析液為0.003ml/L NaCI。
[2]膠體金顆粒的包被 以生物大分子包被膠體金顆粒時,，首先需要確定其精確用量,，即蛋白質(zhì)*包被膠體金所需蛋白質(zhì)的zui小劑量。因為過多或過少地結(jié)合生物大分子均可使膠體金呈不穩(wěn)定狀態(tài),，它們的*濃度可通過如下方法獲得,。制備好的膠體金以0.1mol/L K2CO3，調(diào)pH 至6.2（SPA 的等電點）待與SPA 結(jié)合,。用一個滴定盤或一排小試管,，以0.005mol/L NaCl 連續(xù)稀釋50μl SPA（1mg/m1）至第十孔或第十管為止。然后,，分別于每孔中加入250μ1 的膠體金,，5min后再加入250μ1 10％ NaCl，l min 后震蕩試管,，這時SPA 濃度較低的孔中,，膠
體金由紅色變?yōu)樽仙f明SPA 的量不足以包被膠體金,。以膠體金未改變顏色,，且SPA 濃度zui稀一孔膠體金與SPA 的比例，計算出全部膠體金溶液所需SPA 的總量,，zui后以10～20％ 過量加入到膠體金中,，結(jié)合2—5min，再加入1％ 聚乙二醇（MW 20,，000）至zui終濃度為0.05％,，以進一步穩(wěn)定包埋后的膠體金。
[3]膠體金的濃縮純化及儲存 包被好的膠體金可用離心的方法使穩(wěn)定的金顆粒沉淀于管底,，而與多余的蛋白分開,，使探針得以濃縮和純化。將SPA—金顆粒復合物加到幾個洗凈的離心管中，再于離心管底部加進3—6 ml 5％ 甘油,、0.05％聚乙二醇,、0.02％疊氮鈉的混合液墊層。純化2—5nm 的金探針時,，以125,，000×g 離心45min（4℃）；純化8～15nm 直徑金探針時,，以60,，000×g 離心45~60min（4℃）。離心后SPA—金顆粒復合物濃縮于管底部,，呈暗紅色,，盡量吸去無色上清后，收取暗紅色層,，而緊挨管壁的致密凝集塊不應收集,。濃縮純化的膠體金探針置4℃保存待用，有效期約6 個月,。
elisa檢測 elisa實驗 MAPKAPK3