詳細(xì)介紹
elisa檢測(cè) elisa實(shí)驗(yàn) ACEⅠ
產(chǎn)品名稱:人ACEⅠ ELISA試劑盒
產(chǎn)品別名:人血管緊張素Ⅰ轉(zhuǎn)化酶ELISA試劑盒
英文名稱:Human Angiotensin Ⅰ Converting Enzyme,ACEⅠ ELISA KIT
產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T
檢測(cè)方法:ELISA酶聯(lián)免疫
待檢樣本:體液,,血清,血漿,,細(xì)胞培養(yǎng)上清液,,尿液,組織勻漿,心房水標(biāo)本等等,。
保存條件:2-8℃
ELISA技術(shù)操作要點(diǎn),,結(jié)合物
酶標(biāo)記的抗原或抗體稱為結(jié)合物(conjugate)??乖捎诨瘜W(xué)結(jié)構(gòu)不同,,可用不同的方法與酶結(jié)合。如為蛋白質(zhì)抗原,,基本上可參考抗體酶標(biāo)記的方法,。制備抗體酶結(jié)合物的方法通常有以下幾種。
1.戊二醛交聯(lián)法戊二醛是一種雙功能團(tuán)試劑,,可以使酶與蛋白質(zhì)或其他抗原的氨基通過它而偶聯(lián),。戊二醛交聯(lián)可用一步法(如連接AP),也可用二步法(如連接HRP),。舉例如下:
2~5mg純抗體與5mgAP混合于0.1mol/LpH6.8的磷酸緩沖液1ml中,,4℃下對(duì)同上緩沖液透析平衡。磁力攪拌下,,緩慢加入1%戊二醛0.05ml,,在室溫下放置2小時(shí)。在4℃下對(duì)0.05mol/LpH8.0Tris緩沖液透析平衡,,即得酶標(biāo)抗體,。
辣根過氧化物酶可溶解于50%飽和度硫酸銨中。用上法交聯(lián)后可用50%飽和度硫酸銨沉淀酶標(biāo)抗體,,棄去上清中游離酶,。
戊二醛一步法操作簡(jiǎn)便,、有效,而且重復(fù)性好,。缺點(diǎn)是交聯(lián)時(shí)分子間的比例不嚴(yán)格,,大小也不一,影響效果,。
制備HRP抗體結(jié)合物也可用二步法,,即先將HRP與戊二醛作用,透析除去戊二醛,,在pH9.5緩沖液中再與抗體作用而形成酶標(biāo)抗體,。此法的效率可高于一步法10倍左右。
2. 過碘酸鹽氧化法本法只用于HRP的交聯(lián),。該酶含18%碳水化合物,,過碘酸鹽將其分子表面的多糖氧化為醛基。用硼氫化鈉(NaBH4)中和多余的過碘酸,。酶 上的醛根很活潑,,可與蛋白質(zhì)結(jié)合,形成按摩爾比例結(jié)合的酶標(biāo)結(jié)合物,。有人認(rèn)為此法為辣根過氧化物酶交聯(lián)zui有效的方法,。但也有只認(rèn)為由于所用試劑較為劇烈, 各批實(shí)驗(yàn)結(jié)果不易重復(fù),。
elisa檢測(cè) elisa實(shí)驗(yàn) ACEⅠ