化工儀器網(wǎng)
產(chǎn)品簡(jiǎn)介
上海恒遠(yuǎn)公司長(zhǎng)期供應(yīng)高品質(zhì)“人MASP ELISA試劑盒"具有高效、靈敏,、特異的抗體，穩(wěn)定的重復(fù)性和可靠性,，適用血清,、血漿、組織勻漿液,、細(xì)胞培養(yǎng)上清液,、尿液等多種標(biāo)本類型。我公司始終以質(zhì)量求生存，以信譽(yù)為保障,。
詳細(xì)介紹
MASP ,elisa法,人甘露聚糖結(jié)合凝集素相關(guān)絲氨酸蛋白酶
產(chǎn)品別名：人甘露聚糖結(jié)合凝集素相關(guān)絲氨酸蛋白酶ELISA試劑盒
英文名稱：Human mannan binding lectin associated serine protease,MASP ELISA KIT
產(chǎn)品規(guī)格：48T/96T
檢測(cè)方法：ELISA酶聯(lián)免疫
產(chǎn)品用途: 科研ELISA檢測(cè)試劑盒
檢測(cè)原理： 采用雙抗體夾心ABC-ELISA法
保存：2-8℃
斑點(diǎn)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法原理分析
斑點(diǎn)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法原理分析,，斑點(diǎn)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法（DoISA,DELISA）是以纖維素膜代替免疫酶固相載體法中常用的聚苯乙烯微量反應(yīng)板而建立的一種免疫檢驗(yàn)方法。DELISA不僅保留了常規(guī)ELISA的優(yōu)點(diǎn),，而且還彌補(bǔ)了抗原或抗體對(duì)載體包被不牢等不足,，所以具有敏感性高，特異性強(qiáng),，被檢樣品用量少,，節(jié)省材料，不需特殊儀器,，結(jié)果判定簡(jiǎn)單易行和便于長(zhǎng)期保存等特點(diǎn),。因此，該法自問(wèn)世以來(lái),，以其*的優(yōu)勢(shì),，廣泛應(yīng)用于抗原抗體的檢測(cè)和雜交瘤細(xì)胞的篩選等。
DELISA的基本原理與常規(guī)ELISA和免疫酶染色法基本相同,，即將抗原或抗體首先吸附在纖維素薄膜（如硝酸纖維素膜,，NC）表面，并保持其免疫活性,，通過(guò)與相應(yīng)的抗體或抗原和酶標(biāo)記物的一系列免疫反應(yīng),，形成酶標(biāo)記抗原抗體復(fù)合物，在底物的參與下,，結(jié)合物上的酶催化底物使其水解,、氧化成另一種帶色物質(zhì)，沉著于抗原抗體復(fù)合物吸附的部位,，呈現(xiàn)出肉眼可見(jiàn)的顏色斑點(diǎn),。試驗(yàn)的結(jié)果可通過(guò)顏色斑點(diǎn)的出現(xiàn)與否和色澤深度進(jìn)行判定。DELISA常用的檢測(cè)方法有直接法,、間接法,、雙抗體夾心法、雙夾心法和競(jìng)爭(zhēng)法等,。
1 材料
（1） 載體：硝酸纖維素膜022～045μm,Schleiche &am Schucll或國(guó)產(chǎn),；混合硝酸纖維素膜022μm，上海醫(yī)藥工業(yè)研究院生產(chǎn),。
（2） 保溫液及洗滌液：保溫液為含01%A,、005%Tween20 （001mol/L,pH值74）；洗滌液為005%Tween20 ,。
（3） 封閉劑：含1%A或4%蛋清或3%白明膠的,。
（4） 口蹄疫單抗：口蹄疫病毒A型單克隆抗體（AFMcAb）,、O型多克隆抗體（OFPcAb，由O型標(biāo)準(zhǔn)病毒免疫BALB/c鼠制得）,，由新疆畜牧*獸醫(yī)研究所提供,。
（5） A、O,、C,、ZB型口蹄疫標(biāo)準(zhǔn)抗原：由蘭州獸醫(yī)研究所提供。
（6） 凍干辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記兔抗BALB/c鼠抗體：衛(wèi)生部生物制品研究所生產(chǎn),。
（7） 底物溶液：3,3二氨基聯(lián)苯胺50mg,005mol/L,、pH值76 TrisHCl
緩沖液100ml，溶解后過(guò)濾,，4℃避光保存,。臨用前按003%加入H2O2。
（8） 被檢抗原的制備：水皰液可直接點(diǎn)樣,。水皰皮用生理鹽水洗凈,，晾干，稱重,，剪碎,，加中性玻璃砂研磨，用生理鹽水制成1∶5～1∶10懸液,，室溫浸泡2h,，振搖后，1 500～2 000 r/min離心10min,，上清液即可用于點(diǎn)樣,。
斑點(diǎn)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法原理分析，2 方法
DELISA間接法程序
（1） 壓跡：根據(jù)樣品的數(shù)量剪取一片硝酸纖維素膜或混合纖維素膜,。用直徑3～5mm圓形打孔
器（瓊脂平板打孔器）,，在膜的光滑面按順序壓上痕跡，作為點(diǎn)樣部位,。將膜置蒸餾水中浸泡,，待*浸濕后，取出室溫自然干燥,。
（2） 點(diǎn)樣：用微量移液器分別吸取1～2μl（或用玻璃棒,、毛細(xì)管蘸一滴）被檢抗原液，滴于
圓圈內(nèi),，自然干燥,。為增加抗原吸附量，也可在點(diǎn)樣干燥后,，再進(jìn)行第二次點(diǎn)樣,。同時(shí)作陰、陽(yáng)性抗原對(duì)照,。
（3） 封閉：將膜置平皿或小池內(nèi),，加入封閉劑，37℃浸泡30～60min,。取出稍置片刻,，用洗液漂洗2次，晾干,。
（4） 與AFMcAb或OFPcAb反應(yīng)：用保溫液對(duì)AFMcAb或OFPcAb作適當(dāng)稀釋,，加入反應(yīng)池中，于37℃覆蓋膜2h,。
（5） 洗滌：用洗滌液漂洗膜3次,，每次3min，晾干,。
（6） 與酶結(jié)合物反應(yīng)：凍干辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記兔抗BALB/c鼠抗體用保溫液作1∶80稀釋,，37℃覆蓋膜1h。
（7） 洗滌：3次,，方法同上,。
（8） 顯色：將膜浸入底物溶液中，避光染色5～15min,。
（9） 終止反應(yīng)：用蒸餾水漂洗濾膜,，晾干。
斑點(diǎn)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法原理分析,，3結(jié)果判定
在陰,、陽(yáng)對(duì)照正常情況下，以在膜圓圈內(nèi)出現(xiàn)棕色斑點(diǎn)為陽(yáng)性,，無(wú)色為陰性,。膜干燥后，可長(zhǎng)期保存,。
在應(yīng)用DELISA間接法,、雙抗體夾心法等檢測(cè)方法時(shí)，如果膜上包被的是已知的標(biāo)準(zhǔn)抗原或抗體,，而不是被檢樣品,，為了操作方便，可將上述的“診斷膜”按壓跡剪成小片,，置微量反應(yīng)板的小孔中,。在微孔中，“診斷膜”與相應(yīng)的被檢樣品和診斷液發(fā)生一系列的抗原抗體反應(yīng)和酶促反應(yīng),。在試驗(yàn)中,，被檢樣品和診斷液的用量均為每孔50μl,，其他反應(yīng)條件和操作法與常規(guī)ELISA相同。
斑點(diǎn)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法原理分析,，4注意事項(xiàng)
1 點(diǎn)樣量不易過(guò)大,，以免溢出壓跡圈外，造成各樣品混合,，如要增加樣品吸附量,，可在一次點(diǎn)樣干燥后，再進(jìn)行第2次點(diǎn)樣,。
2 膜包被后,，一定要封閉確實(shí)，防止抗原或抗體的非特異性吸附,，避免膜本底染色過(guò)深,。
3 結(jié)果判定時(shí)，應(yīng)與陰,、陽(yáng)性對(duì)照斑點(diǎn)反復(fù)比較,，盡量克服肉眼觀察所帶來(lái)的誤差。
MASP ,elisa法,人甘露聚糖結(jié)合凝集素相關(guān)絲氨酸蛋白酶