詳細(xì)介紹
AMPK,檢測試劑盒,人磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶
產(chǎn)品別名:人磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶ELISA試劑盒
英文名稱:Human Phosphorylated adenosine monophosphate activated protein kinase,AMPK ELISA KIT
產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T
檢測方法:ELISA酶聯(lián)免疫
產(chǎn)品用途: 科研ELISA檢測試劑盒
檢測原理: 采用雙抗體夾心ABC-ELISA法
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PCR實驗原理
PCR實驗原理,,免疫PCR結(jié)合了抗原抗體反應(yīng)的特異性和PCR的高敏感性,,是一種極為敏感的抗原檢測技術(shù),適合于各種微量抗原的檢測,。免疫PCR的關(guān)鍵在于形成抗體—標(biāo)記DNA耦聯(lián)物,,作為橋梁連接免疫反應(yīng)的特異性和PCR的高擴增能力。
熒光標(biāo)記,、放射性核素標(biāo)記和酶標(biāo)記是目前免疫化學(xué),、免疫學(xué)以及分子生物學(xué)中應(yīng)用的常規(guī)檢測技術(shù),具有較高的靈敏性,。但在早期,,熒光標(biāo)記、酶標(biāo)記技術(shù)還缺乏足夠的靈敏度,。放射性免疫技術(shù)的靈敏度雖能達到lng/m1,,但由于需要特殊的設(shè)備和安全防護限制了它在臨床中的應(yīng)用。1992年Sano等人將免疫測定技術(shù)與PCR結(jié)合,,創(chuàng)建了一種全新的,、極其敏感的抗原分子檢測技術(shù),即免疫PCR,。
PCR實驗原理,,PCR技術(shù)自1985年問世以來,已成為實驗室的常規(guī)技術(shù),,也是現(xiàn)代分子生物學(xué)研究中*的手段,,是一種極為敏感的放大系統(tǒng)。而免疫PCR正是運用PCR的高度敏感性來放大抗原抗體反應(yīng)的特異性,,實驗中可檢測到數(shù)百個抗原分子,,在理論上甚至可檢測到1至數(shù)個抗原分子。
免疫PCR主要由兩個部分組成,,第1部分是類似于普通ELISA的抗原抗體反應(yīng),,第2部分即常規(guī)的PCR擴增和電泳檢測。免疫PCR與ELISA的區(qū)別在于ELISA是以ALP或HRP來標(biāo)記抗體,,用顏色反應(yīng)來表明陽性或陰性結(jié)果,;而免疫PCR則是以一段特定的雙鏈或單鏈DNA來標(biāo)記抗體,用PCR擴增抗體所連接的DNA,,并進行電泳檢測,,因此PCR產(chǎn)物的量可反映抗原分子的量。由于PCR的高擴增能力,只要存在著極微量的抗原抗體反應(yīng),,PCR都能大量擴增抗體所連接的DNA分子,,再用電泳表明實驗結(jié)果。
免疫PCR的關(guān)鍵之處在于用一個連接分子將一段特定的DNA連接到抗體上,,在抗原和DNA之間建立相對應(yīng)關(guān)系,,從而將對蛋白質(zhì)檢測轉(zhuǎn)變?yōu)閷怂岬臋z測。zui初Sano等人建立的免疫PCR實驗流程如下,。
(1)包被緩沖液稀釋抗原(如A),,并固定在微孔板上。
(2)微孔板上加入相應(yīng)的已稀釋的單克隆抗體,,并洗去未結(jié)合的抗體分子,。
(3)加入稀釋的已與生物素化PUCl9結(jié)合的鏈親和素—蛋白A嵌合體,并洗去未結(jié)合的嵌合蛋白—PUCl9復(fù)合物,。
(4)PCR擴增抗體所連接的PUCl9,。運用這種方法,Sano等人檢測到600個A抗原分子,。與用ALP作為標(biāo)記物的ELISA方法相比,,免疫PCR的敏感度比ELISA高10‘倍。免疫PCR系統(tǒng)中,,鏈親和素—蛋白A嵌合體作為一個連接分子起著橋梁作用,, PCR實驗原理
AMPK,檢測試劑盒,人磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶