詳細(xì)介紹
ADH elisa法 檢測(cè)試劑盒
產(chǎn)品別名:人乙醇脫氫酶ELISA試劑盒
英文名稱:Human alcohol dehydrogenase,ADH ELISA KIT
產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T
檢測(cè)方法:ELISA酶聯(lián)免疫
產(chǎn)品用途: 科研ELISA檢測(cè)試劑盒
檢測(cè)原理: 采用雙抗體夾心ABC-ELISA法
保存:2-8℃
放免檢測(cè)分析原理
放射免疫分析的原理:就是利用放射性核素標(biāo)記抗原或抗體,,然后與被測(cè)的抗體或抗原結(jié)合,,形成抗原抗體復(fù)合物的原理來進(jìn)行分析的。它又分為兩種方法,。
一,、競(jìng)爭(zhēng)性RIA,又稱傳統(tǒng)RIA
主要特點(diǎn):標(biāo)記的是抗原,。其原理:未知抗原Ag+標(biāo)記抗原Ag +已知定量抗體Ab標(biāo)記抗原與抗體復(fù)合物AgAb+未知抗原與抗體復(fù)合物Ag Ab+游離標(biāo)記抗原Ag (去除)(未知抗原多,,標(biāo)記抗原與定量抗體結(jié)合的復(fù)合物就少,表現(xiàn)為負(fù)相關(guān)),。
臨床上甲胎蛋白(AFP),,癌胚抗原(CEA),8 一微球蛋白(pz—MG ),,鐵蛋白(Fer),,人絨毛膜促性腺激素p亞單位(HCG-13)等的檢測(cè)都是競(jìng)爭(zhēng)性RIA法原理。競(jìng)爭(zhēng)性RIA法,,根據(jù)加樣順序與溫育次數(shù)的區(qū)別,,反應(yīng)方式分三種:平衡法,將非標(biāo)記抗原(被測(cè)物與標(biāo)準(zhǔn)品),、抗體,、標(biāo)記抗原依次加入反應(yīng)管,混勻后一次性溫育至反應(yīng)達(dá)到動(dòng)態(tài)平衡,,再加分離劑分離B(復(fù)合物)與F(游離物)如:AFP,,8 一MG,F(xiàn)er,;順序加樣法,,先將非標(biāo)記抗原(被測(cè)物與標(biāo)準(zhǔn)品),與抗體在反應(yīng)管內(nèi)作*次溫育,,待反應(yīng)達(dá)到動(dòng)態(tài)平衡后,。加入標(biāo)記抗原,再作第二次溫育后,,分離B與F如:CEA,;急診檢測(cè)法:為臨床急需檢測(cè)結(jié)果而提出的反應(yīng)方式,不等RIA 反應(yīng)達(dá)到動(dòng)態(tài)平衡就終止反應(yīng),;分離劑的選擇有,,PEG(聚乙二醇),,第二抗體等,。
現(xiàn)在一般采用的是:第二抗體與PEG合用的方法,,稱為雙抗體一PEG法。
PEG原理:PEG濃度達(dá)到7 一9 時(shí)能使抗原一抗體復(fù)合物沉淀,。
優(yōu)點(diǎn):經(jīng)濟(jì),,簡(jiǎn)便,通用,。
缺點(diǎn):重復(fù)性差,,非特異性結(jié)合率高。
第二抗體:*抗體是可與被測(cè)抗原進(jìn)行特異結(jié)合的抗體,,來自家兔或豚鼠,。用*抗體為抗原,作用到羊,,馬身上,,產(chǎn)生的抗*抗體的抗體稱第二抗體。第二抗體與*抗體在適當(dāng)條件下發(fā)生特異性結(jié)合,,分子量很大的免疫復(fù)合物(AgAb ×Ab ),,能自然沉淀。
優(yōu)點(diǎn):分離效果好,。非特異性結(jié)合率低,。
缺點(diǎn):增加經(jīng)費(fèi)投入。需要第二次溫育,,延長(zhǎng)了時(shí)間,。
所以就產(chǎn)生了兩者合用的雙抗體一PEG法,它結(jié)合了上述兩種方法的優(yōu)點(diǎn),。
二,、非競(jìng)爭(zhēng)性RIA,又稱免疫放射分析(IRMA)
主要特點(diǎn):標(biāo)記的是抗體,。
按反應(yīng)原理分為兩種:
(一)單位點(diǎn)IRMA
其原理:抗原只有一個(gè)抗原決定簇,,所測(cè)的抗原為小分子抗原,Ab+AgAg Ab+ Ab+ ImAd—Ag ImAd—AgAb+Ag Ab(去除)(負(fù)相關(guān)):(ImAd—Ag)固相抗原免疫吸附劑,,一般用聚苯乙烯塑料珠包被抗原,;雙位點(diǎn)IRMA:抗原有兩個(gè)抗原決定簇,所使用的兩種亞型抗體在與同一抗原分子結(jié)合時(shí)互不干擾ImAd—Ab+AgImAd—Ab—Ag+ AbImAd-Ab—Ag- Ab+ Ab(過剩的,,游離的):(ImAd—Ab)固相抗體免疫吸附劑,,一般用聚苯乙烯塑料珠包被抗體。
(二)雙位點(diǎn)IRMA,,又稱雙抗體夾心法
從加樣測(cè)定順序上看,,有三種方法:固相抗體先與未知抗原結(jié)合,再與標(biāo)記抗體結(jié)合(正向兩步法),。然后去除游離的標(biāo)記抗體,,測(cè)固相抗體一抗原一標(biāo)記抗體復(fù)合物的放射性計(jì)數(shù),;未知抗原先與標(biāo)記抗體結(jié)合,再與同相抗體結(jié)合(反向兩步法),。然后去除游離的標(biāo)記抗體,,測(cè)固相抗體一抗原一標(biāo)記抗體復(fù)合物的放射性計(jì)數(shù);未知抗原與固相抗體和標(biāo)記抗體同時(shí)反應(yīng)(一步法,,又稱同時(shí)加樣法),。然后去除游離的標(biāo)記抗體,測(cè)固相抗體一抗原一標(biāo)記抗體復(fù)合物的放射性計(jì)數(shù),。
這三種方法都夾心狀的抗體一抗原一抗體復(fù)合物,,故又稱雙抗體夾心法。
糖類抗原CA50,,CA125就用的是其中的第三種方法(一步法),,血清中的未知抗原與固相抗體和標(biāo)記抗體同時(shí)反應(yīng),夾心狀的抗體一抗原一抗體復(fù)合物,,然后去除游離的標(biāo)記抗體,,測(cè)固相抗體一抗原一標(biāo)記抗體復(fù)合物的放射性計(jì)數(shù)。
ADH elisa法 檢測(cè)試劑盒