詳細介紹
ALDH elisa法 檢測試劑盒
產(chǎn)品別名:人乙醛脫氫酶ELISA試劑盒
英文名稱:Human aldehyde dehydrogenase,ALDH ELISA KIT
產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T
檢測方法:ELISA酶聯(lián)免疫
產(chǎn)品用途: 科研ELISA檢測試劑盒
檢測原理: 采用雙抗體夾心ABC-ELISA法
保存:2-8℃
影響Elisa結(jié)果的原因分析
ELISA原理是:①使抗原(或抗體)結(jié)合到某種固相載體表面,并保持其免疫活性,;②使抗原(或抗體)與某種酶聯(lián)結(jié)成酶標 抗原(或抗體),,而且此酶標抗原(或抗體)既保留其免疫活性,又保留其酶活性,;③測定時將受檢標本(抗體或抗原)和酶標抗原(或 抗體)按不同步驟與固相載體表面的抗原或抗體進行反應,,再用洗滌方法使固相載體上形成的抗原抗體復合物與其它物質(zhì)分開,zui后結(jié)合 在固相載體上的酶量與標本中受檢的抗體或抗原量成一定比例,;再加入酶反應底物后,,底物被酶催化后變?yōu)橛猩a(chǎn)物,根據(jù)其顏色反應的 深淺進行定性或定量分析,,以了解被測標本中抗體或抗原含量,。
引起ELISA測定錯誤結(jié)果的原因主要有:①標本因素,;②試 劑因素;③操作因素,。 血清是zui常用的ELISA標本,,血漿一般可視為與血清同等的標本,標本引起的假陽性和假陰性結(jié)果主要是干擾性物質(zhì)所致,,主要有以下兩種情況:
一. 有人認為大約40%的人血清標本中含有非特異性干擾物質(zhì),,可以不同程度影響檢測結(jié)果。常見的干擾物質(zhì)有:類風濕因子,、補體,、嗜異 性抗體、嗜靶抗原自身抗體,、醫(yī)源性誘導的抗鼠Ig (s)抗體,、交叉反應物質(zhì)和其它物質(zhì)等。
(1)補體 ELISA系統(tǒng)中固相一抗和標記二抗過程中,,抗體分子發(fā)生變構,,其FC段的補體C1q分子結(jié)合位點被暴露出來,使C1q 可以將二者連接起來,,從而造成假陽性,。解決的辦法是:①用EDTA稀釋標本;②用53℃,,10 min或56℃,,30 min加熱血清使C1q滅活。
(2)嗜異性抗體 人類血清中含有能與嚙齒類動物(如鼠等)Ig (s) 結(jié)合的天然嗜異性抗體,,可將ELISA系統(tǒng)中一抗和二抗連接起來,,也能造成假陽性。解決的辦法是:可在標本稀釋液中加入過量的動 物Ig (s) ,,但加入量不足或亞類不同時無效,。
(3)嗜靶抗原的自身抗體 抗甲狀腺球蛋白、抗胰島素等嗜靶抗原的自身抗體,,有時能與靶抗原結(jié)合形成復合物,,在ELISA方法中均可干擾抗原抗體測定結(jié)果。 為避免以上情況出現(xiàn),,解決的辦法是:測定前需用理化方法將其解離后再測定,。
二. 由于用于ELISA測定的血標本的采集、貯存等不當所致,。如標本溶血,、標本被細菌污染、標本貯存過久,、標本凝集 不全和采血管中添加物等影響,。
(1)標本受細菌污染 因菌體中可能含有內(nèi)源性辣根過氧化物酶,,因此,被細菌污染的標本同溶血標本一樣,,亦可產(chǎn)生非特異性顯色而干擾測定結(jié)果,。
(2)標本溶血 由于各種人為原因引起的標本溶血,均可因紅細胞破壞溶解時釋放出大量具有過氧化物酶活性的血紅蛋白,,在以辣根過氧化物酶為標記的 ELISA測定中,,會導致非特異性顯色,干擾測定結(jié)果,。為克服上述干擾作用,,標本采集時必須注意避免溶血。
(3)標本保存不當 在冰箱中保存過久的標本,,血清中IgG可聚合成多聚體,、AFP可形成二聚體,在間接法ELISA測定中會導致本底過深,、甚至造成 假陽性,;標本放置時間過長(如一天以上),有時抗原或抗體免疫活性減弱,,亦可出現(xiàn)假陰性,。為克服上述干擾,,ELISA測定的血清 標本宜為新鮮采集,;如不能立即測定,5天內(nèi)測定的血清標本可存放于4℃,,1周后測定的血清標本應低溫凍存,;凍存后融解的標本,蛋 白質(zhì)局部濃縮,,分布不均,,應充分混合后再測定,但混勻時應輕柔,,不可強烈振蕩,。
(4)標本管中添加物質(zhì)的影響 抗凝劑(如肝素,EDTA),、酶抑制劑(如NaN3可抑制ELISA系統(tǒng)中辣根過氧化物酶活性)及快速分離血清的分離膠等均對E LISA測定有一定干擾作用,。
(5)標本凝集不全 在沒有促凝劑和抗凝劑存在的情況下,正常血液采集后1/2~2h開始凝固,,18~24h*凝固,。臨床檢驗工作中,有時為了爭取 時間快速檢測,,常在血液還未開始凝固時即強行離心分離血清,,此時的血清中仍殘留部分纖維蛋白原,,在ELISA測定過程中可以形成 肉眼可見的纖維蛋白塊,易造成假陽性結(jié)果,;這類情況于次日復查時因血凝已*,,血清中不再有纖維蛋白原存在,故復查結(jié)果變?yōu)殛幮?,。為避免上述干擾作用,,解決的辦法是血液標本采集后必須使其充分凝固后再分離血清,或標本采集時用帶分離膠的采血管或于采血 管中加入適當?shù)拇倌齽?
綜上所述,,檢驗ELISA假陽性或假陰性結(jié)果,,在考慮試劑因素和操作因素之外,更多的應從標本因素方面進行分析,,并應采取相應措施排除干擾作用,。
ALDH elisa法 檢測試劑盒