詳細(xì)介紹
OxLDL 檢測試劑盒 elisa原理
人OxLDL ELISA試劑盒
產(chǎn)品別名:人氧化低密度脂蛋白ELISA試劑盒
英文名稱:Human oxidized lowdensity lipoprotein,OxLDL ELISA KIT
產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T
保存條件:2-8℃
主要作用:研究使用
Elisa操作方法
Elisa操作方法(一)
一,、標(biāo)本的收集和保存
ELISA測定的標(biāo)本zui為常用的是血清(漿),有時因為特定的檢測目的,,也用到唾液,、腦脊液、尿液,、糞便等標(biāo)本,。目前臨床上使用血清標(biāo)本測定的標(biāo)志物一般有傳染性病原體的抗原和抗體、腫瘤標(biāo)志物,、激素,、特種蛋白、細(xì)胞因子和治療藥物等,。對用于激素和治療藥物測定的血清標(biāo)本的收集,,要注意收集時間甚或體位有可能會對測定結(jié)果產(chǎn)生影響。如可的松在早晨4~6點之間,,會有一峰值出現(xiàn):生長激素,、促黃體激素(LH)和促卵泡激素(FSH)均以陣發(fā)性方式釋放,因此,,在測定此類激素時,,有必要在密切相連的時間間隔內(nèi)采取數(shù)份血樣本,以其中間值為測定值,。用于傳染性病原體的抗原和抗體,、腫瘤標(biāo)志物和特種蛋白等的檢測的血清標(biāo)本的收集則沒有時間和體位方面的影響,只是在處理和保存方面要考慮以下幾個方面:
(1)血清標(biāo)本如是以無菌操作分離,,則可以在2~8℃下保存一周,,如為有菌操作,則建議冰凍保存,。樣本的長時間保存,,應(yīng)在-70℃以下,。
(2)樣本的采集及血清分離中要注意盡量避免細(xì)菌污染,,一則細(xì)菌的生長,其所分泌的一些酶可能會對抗原抗體等蛋白產(chǎn)生分解作用;二則一些細(xì)菌的內(nèi)源性酶如大腸桿菌的β-半乳糖苷酶本身會對用相應(yīng)酶作標(biāo)記的測定方法產(chǎn)生非特異性干擾,。
(3)要注意避免出現(xiàn)嚴(yán)重溶血,。血紅蛋白中含有血紅素基團(tuán),其有類似過氧化物的活性,,因此,,在以HRP為標(biāo)記酶的ELISA測定中,如血清標(biāo)本中血紅蛋白濃度較高,,則其就很容易在溫育過程中吸附于固相,,從而與后面加入的HRP底物反應(yīng)顯色。
(4)標(biāo)本在保存中如出現(xiàn)細(xì)菌污染所致的混濁或絮狀物時,,應(yīng)離心沉淀后取上清檢測
(5)冰凍保存的血清標(biāo)本須注意避免因停電等造成的反復(fù)凍融,。標(biāo)本的反復(fù)凍融所產(chǎn)生的機(jī)械剪切力將對標(biāo)本中的蛋白等分子產(chǎn)生破壞作用,從而引起假陰性結(jié)果,。此外,,凍融標(biāo)本的混勻亦應(yīng)注意,不要進(jìn)行劇烈振蕩,,反復(fù)顛倒混勻即可,。
Elisa操作方法(二)
二、試劑準(zhǔn)備
在臨床實驗室,,對試劑準(zhǔn)備一般不太注意,,通常的做法是,在實驗時將試劑從冰箱中拿出來即用,,而忽略了這種做法有可能影響后面溫育時間不夠的問題,,其直接的后果是對一些弱陽性標(biāo)本的檢測出現(xiàn)假陰性。因此在ELISA測定中試劑的準(zhǔn)備zui為關(guān)鍵的是,,在實驗開始前,,將試劑盒先從冰箱中拿出來,在室溫下放置20分鐘以上后,,再進(jìn)行測定,,以使試劑盒在使用前與室溫平衡。這樣做的目的,,主要是為了在后面的溫育反應(yīng)步驟中,,能使反應(yīng)微孔內(nèi)的溫度能較快地達(dá)到所要求的高度,以滿足測定要求,。其次,,目前的商品ELISA試劑盒中的洗板液均需在實驗室使用時對所提供的濃縮液稀釋配制,因此稀釋時所用的蒸餾水或去離子水應(yīng)保證質(zhì)量,。此外,,當(dāng)試劑盒以O(shè)PD為底物時,,則底物溶液應(yīng)在反應(yīng)顯色前臨時配制。
三,、加血清樣本及反應(yīng)試劑
在現(xiàn)在的ELISA商品試劑盒中,,血清樣本的加入幾乎是*的要使用微量加樣器加入樣本的步驟。使用微量加樣器加樣必須注意的關(guān)鍵點是:加樣不可太快,,要避免加在孔壁上部,,不可濺出和產(chǎn)生氣泡。加樣太快,,無法保證微量加樣的準(zhǔn)確性和均一性,。加在孔壁上部的非包被區(qū),易導(dǎo)致非特異吸附,。濺出會對鄰近孔產(chǎn)生污染,。出現(xiàn)氣泡則反應(yīng)液界面有差異。試劑的加入在國產(chǎn)試劑盒中基本上均是從滴瓶中滴加,,除了要注意滴加的角度外,,滴加的速度也很重要,滴加太快,,很容易出現(xiàn)重復(fù)滴加或加在兩孔之間的現(xiàn)象,,這樣就會在孔內(nèi)的非包被區(qū)出現(xiàn)非特異吸附,從而引起非特異顯色,。所以,,有時候一份標(biāo)本用相同的試劑盒這次測定為陽性,下次測定為陰性,,往往就是上述加樣及試劑的錯誤所致,。
OxLDL 檢測試劑盒 elisa原理