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產(chǎn)品簡介
上海恒遠(yuǎn)公司長期專業(yè)經(jīng)營“人OT/BGP ELISA試劑盒",，現(xiàn)貨供應(yīng),，*，質(zhì)量保證,。中英文雙版說明書,，提供實(shí)驗(yàn)代測服務(wù)。需要產(chǎn)品以及其它詳細(xì)信息請直接來電索取,。
詳細(xì)介紹
檢測試劑盒 elisa實(shí)驗(yàn) OT
人OT/BGP ELISA試劑盒
產(chǎn)品別名：人骨鈣素/骨谷氨酸蛋白ELISA試劑盒
英文名稱：Human Osteocalcin/Bone gla protein,OT/BGP ELISA KIT
產(chǎn)品規(guī)格：48T/96T
保存條件：2-8℃
主要作用：科研
酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)
酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)Enzyme-Linked ImmunosorbentAssays,ELISA （以下簡稱ELISA）是酶免疫測定技術(shù)中應(yīng)用zui廣的技術(shù)?，F(xiàn)已成功地應(yīng)用于多種病原微生物所引起的傳染病、寄生蟲病及非傳染病等方面的免疫診斷,。也已應(yīng)用于大分子抗原和小分子抗原的定量測定,。 ELISA法具有靈敏、特異,、簡單,、快速、穩(wěn)定及易于自動化操作等特點(diǎn),。
一,、ELISA基本方法
將已知的抗原或抗體吸附在固相載體（聚苯乙烯微量反應(yīng)板）表面，使酶標(biāo)記的抗原抗體反應(yīng)在固相表面進(jìn)行,，用洗滌法將液相中的游離成分洗除,。常用的 ELISA 法有雙抗體夾心法和間接法，前者用于檢測大分子抗原,，后者用于測定特異抗體,。
二、ELISA法基本原理
ELISA方法的基本原理是酶分子與抗體或抗抗體分子共價(jià)結(jié)合，此種結(jié)合不會改變抗體的免疫學(xué)特性,，也不影響酶的生物學(xué)活性,。此種酶標(biāo)記抗體可與吸附在固相載體上的抗原或抗體發(fā)生特異性結(jié)合。滴加底物溶液后,，底物可在酶作用下使其所含的供氫體由無色的還原型變成有色的氧化型,，出現(xiàn)顏色反應(yīng)。因此,，可通過底物的顏色反應(yīng)來判定有無相應(yīng)的免疫反應(yīng),，顏色反應(yīng)的深淺與標(biāo)本中相應(yīng)抗體或抗原的量呈正比。此種顯色反應(yīng)可通過LISA檢測儀進(jìn)行定量測定,，這樣就將酶化學(xué)反應(yīng)的敏感性和抗原抗體反應(yīng)的特異性結(jié)合起來,，使ELISA方法成為一種既特異又敏感的檢測方法。
三,、ELISA法注意事項(xiàng)
用于標(biāo)記的酶 用于標(biāo)記抗體或抗抗體的酶須具有下列特性：有高度的活性和敏感性,；在室溫下穩(wěn)定；反應(yīng)產(chǎn)物易于顯現(xiàn),；能商品化生產(chǎn),。
1、抗體的酶標(biāo)記方法,。良好的酶結(jié)合物取決于兩個條件：即高效價(jià)的抗體和高活性的酶,。抗體的活性和純度對制備標(biāo)記抗體至關(guān)重要,，因?yàn)樘禺愋悦庖叻磻?yīng)隨抗體活性和純度的增加而增強(qiáng),。在酶標(biāo)記過程中，抗體的活性有所降低,，故需要純度高,、效價(jià)高及抗原親和力強(qiáng)的抗體球蛋白，使用親和層析提純的抗體,，可提高敏感性,，而且可稀釋使用，減少非特異性吸附,。 酶與抗體交聯(lián),，常用戊二醛法和過碘酸鹽氧化法。
2,、酶標(biāo)抗體標(biāo)記效果測定,，測定內(nèi)容包括酶和抗體活性、結(jié)合物中酶含量和IgG含量,、酶與IgG摩爾比值以及結(jié)合率。
（1） 酶與抗體的活性 常用瓊脂擴(kuò)散或免疫電泳法，使抗原與抗體形成沉淀線,，經(jīng)PBS漂洗1天,，再以蒸餾水浸泡1小時，將瓊脂凝膠片浸于酶底物溶液中著色,，如果出現(xiàn)應(yīng)有的顏色反應(yīng),，再用生理鹽水浸泡，顏色仍然不褪,，表示結(jié)合物既有酶的活性,，也有抗體活性。良好的結(jié)合物在顯色后,，瓊擴(kuò)滴度應(yīng)在1:16以上,。另一個測定方法是用系列稀釋的酶標(biāo)抗體直接以ELISA方法進(jìn)行方陣滴定，此法不僅可以測定標(biāo)記效果,，還可以確定酶標(biāo)抗體的使用濃度,。
（2）結(jié)合物的定量測定 一般是對結(jié)合物中的酶和IgG進(jìn)行定量測定。常用紫外分光光度計(jì)于403nm和280nm
進(jìn)行測定,，然后按下列公式計(jì)算：
酶量（mg/ml）＝OD403×0.42
IgG量（mg/ml）＝（OD280－OD403×0.4）×0.94×0.62
對于過碘酸鈉氧化法制備的標(biāo)記抗體量,，按下列公式計(jì)算：
IgG量（mg/ml）＝（OD280－OD403×0.34）×0.62
已知酶量和IgG量后，即可計(jì)算出標(biāo)記抗體的摩爾（mol）比值,。
HRP/IgG摩爾比值＝HRP（mg/ml）/IgG（mg/ml）×4
結(jié)合物中酶總量＝HRP（mg/ml）×結(jié)合物溶液量
結(jié)合物產(chǎn)率＝結(jié)合物中酶總量/標(biāo)記時加入的酶量×100％
四,、ELISA方法的基本類型
根據(jù)ELISA所用的固相載體而區(qū)分為三大類型：一是采用聚苯乙烯微量板為載體的ELISA，即我們通常所指的ELISA（微量板ELISA）,；另一類是用硝酸纖維膜為載體的ELISA,稱為斑點(diǎn)ELISA（Dot-ELISA）,；再一類是采用疏水性聚脂布作為載體的ELISA，稱為布ELISA（C－ELISA）,。在微量板ELISA中,，又根據(jù)其性質(zhì)不同分為間接ELISA、雙抗體夾心ELISA,、雙夾心ELISA,、競爭ELISA、阻斷ELISA及抗體捕捉ELISA,。
間接ELISA 法主要用于檢測抗體,；雙抗體夾心ELISA 法主要用于檢測大分子抗原；雙夾心ELISA 法與雙抗體夾心ELISA的主要區(qū)別在于：它是采用酶標(biāo)抗抗體檢查多種大分子抗原,，它不僅不必標(biāo)記每一種抗體,，還可提高試驗(yàn)的敏感性；競爭ELISA 法主要用于測定小分子抗原及半抗原,，其原理類似于放射免疫測定,；阻斷ELISA 法主要用于檢測型特異性抗體,；抗體捕捉ELISA 法主要用于檢測IgM抗體；斑點(diǎn)ELISA（Dot-ELISA）與常規(guī)的微量板ELISA比較,，Dot-ELISA具有簡便,、節(jié)省抗原等優(yōu)點(diǎn)，而且結(jié)果可長期保存,，但其也有不足,，主要是在結(jié)果判定上比較主觀，特異性不夠高等,；布ELISA（C－ELISA）C－ELISA（Cloth-ELISA）是加拿大學(xué)者Blais, B. W.等于1989年建立的一種新型免疫檢測技術(shù),。該方法是以疏水性聚脂布（Hydrophobic Polyester Cloth）即滌綸布為固相載體，這種大孔徑的的疏水布具有吸附樣品量大,，可為免疫反應(yīng)提供較大的表面積,，提高反應(yīng)的敏感性，且容易洗滌,，不需特殊儀器等優(yōu)點(diǎn),。
檢測試劑盒 elisa實(shí)驗(yàn) OT