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產品簡介
上海恒遠公司長期專業(yè)經營“人cGMP ELISA試劑盒"，現(xiàn)貨供應,，*,，質量保證。中英文雙版說明書,，提供實驗代測服務,。需要產品以及其它詳細信息請直接來電索取。
詳細介紹
elisa檢測 elisa法 cGMP
人cGMP ELISA試劑盒
產品別名：人環(huán)磷酸鳥苷ELISA試劑盒
英文名稱：Human Cyclic guanosine monophosphate,cGMP ELISA KIT
產品規(guī)格：48T/96T
保存條件：2-8℃
主要作用：研究使用
ELISA是酶聯(lián)接免疫吸附劑測定（ Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay ）的簡稱,。它是繼免疫熒光和放射免疫技術之后發(fā)展起來的一種免疫酶技術,。此項技術自70年代初問世以來，發(fā)展十分迅速,，目前已被廣泛用于生物學和醫(yī)學科學 的許多領域,。 （一） 原理 （二） 操作步驟 （三） 試劑器材
ELISA是以免疫學反應為基礎，將抗原,、牽9體的特異性反應與酶對底物的高效催化作 用相結合起來的一種敏感性很高的試驗技術,。由于抗原、抗體的反應在一種固相載體──聚苯乙烯微量滴定板的孔中進行,，每加入一種試劑孵育后,，可通過洗滌除去 多余的游離反應物，從而保證試驗結果的特異性與穩(wěn)定性,。在實際應用中,，通過不同的設計，具體的方法步驟可有多種,。即:用于檢測抗體的間接法（圖a）,、用于 檢測抗原的雙抗體夾心法（圖b）以及用于檢測小分子抗原或半抗原的抗原競爭法等等。比較常用的是ELISA雙抗體夾心法及ELISA間接法,。
方法一 用于檢測未知抗原的雙抗體夾心法:
1. 包被：用0.05M PH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質含量為1～10μg／ml,。在每個聚苯乙烯板的反應孔中加0.1ml，4℃過夜,。次日,，棄去孔內溶液，用洗滌緩沖液洗3次,，每次3分鐘,。（簡稱洗滌，下同）,。
2. 加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應孔中,，置37℃孵育1小時,。然后洗滌。（同時做空白孔,，陰性對照孔及陽性對照孔）,。
3. 加酶標抗體：于各反應孔中，加入新鮮稀釋的酶標抗體（經滴定后的稀釋度）0.1ml,。37℃孵育0.5～1小時,，洗滌。
4. 加底物液顯色：于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml,，37℃10～30分鐘,。
5. 終止反應：于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml。
6. 結果判定：可于白色背景上,，直接用肉眼觀察結果：反應孔內顏色越深,，陽性程度越強，陰性反應為無色或極淺,，依據所呈顏色的深淺,，以“+”、“-” 號表示,。也可測O·D值：在ELISA檢測儀上,，于450nm（若以ABTS顯色，則410nm）處,，以空白對照孔調零后測各孔O·D值,，若大于規(guī)定的陰 性對照OD值的2.1倍，即為陽性,。
方法二 用于檢測未知抗體的間接法：
用包被緩沖液將已知抗原稀釋至 1～10μg／ml,，每孔加0.1ml，4℃過夜,。次日洗滌3次,。加一定稀釋的待檢樣品（未知抗體）0.1ml于上述已包被之反應孔中,置37℃孵育1小 時,洗滌。（同時做空白,、陰性及陽性孔對照）于反應孔中,，加入新鮮稀釋的酶標第二抗體（抗抗體）0.1ml，37℃孵育30-60分鐘,，洗滌,zui后一遍用 DDW洗滌,。其余步驟同“雙抗體夾心法”的4、5,、6,。
1. 試劑
（1） 包被緩沖液（PH9.6 0.05M碳酸鹽緩沖液）:
NaCO3 1.59克 NaHCO3 2.93克 加蒸餾水至1000ml
（2） 洗滌緩沖液（PH7.4 PBS）：0.15M KH2PO4 0.2克 Na2HPO4·12H2O 2.9克 NaCl 8.0克KCl 0.2克 Tween-20 0.05％ 0.5ml 加蒸餾水至1000ml
（3） 稀釋液:牛血清白蛋白（BSA） 0.1克 加洗滌緩沖液至100ml 或以羊血清、兔血清等 血清與洗滌液配成5～10％使用,。
（4） 終止液（2M H2SO4）：蒸餾水178.3ml,，逐滴加入濃硫酸（98％）21.7ml,。
（5） 底物緩沖液（PH5.0磷酸棗檸檬酸）:0.2M Na2HPO4（28.4克／L） 25.7ml 0.1M 檸檬酸（19.2克／L） 24.3ml 加蒸餾水50ml。
（6） TMB（四甲基聯(lián)苯胺）使用液:TMB（10mg／5ml無水乙醇） 0.5ml底物緩沖液（PH5.5） 10ml0.75％H2O2 32μl
（7） ABTS使用液:ABTS 0.5mg 底物緩沖液（PH5.5） 1ml 3％H2O2 2μl
（8） 抗原,、抗體和酶標記抗體,。
（9） 正常人血清和陽性對照血清。
2. 器材:
（1） 聚苯乙烯塑料板（簡稱酶標板）40孔或96孔,，ELISA檢測儀,，50μl及100μl加樣器，塑料滴頭,，小毛巾,，洗滌瓶。
（2） 小燒杯,、玻璃棒、試管,、吸管和量筒等,。
（3） 4℃冰箱，37℃孵育箱,。
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