詳細介紹
產品名稱:人NGAL ELISA試劑盒
產品別名:人中性粒細胞明膠酶相關脂質運載蛋白ELISA試劑盒
英文名稱:Human neutrophil gelatinase-associated lipocalin,NGAL ELISA KIT
產品規(guī)格:48T/96T
檢測方法:ELISA酶聯(lián)免疫
待檢樣本:體液,,血清,血漿,,細胞培養(yǎng)上清液,,尿液,組織勻漿,心房水標本等等,。
保存條件:2-8℃
試劑的準備
按試劑盒說明書的要求準備實驗中需用的試劑,。ELISA中用的蒸餾水或去離子水,包括用于洗滌的,,應為新鮮的和高質量的,。自配的緩沖液應用pH計測量較正。從冰箱中取出的試驗用試劑應待溫度與室溫平衡后使用,。試劑盒中本次試驗不需用的部分應及時放回冰箱保存,。
保溫
在ELISA中一般有兩次抗原抗體反應,即加標本和加酶結合物后,??乖贵w反應的完成需要有一定的溫度和時間,這一保溫過程稱為溫育(incubation),,有人稱之為孵育,,在ELISA中似不恰當。ELISA屬固相免疫測定,,抗原,、抗體的結合只在固相表面上發(fā)生。以抗體包被的夾心法為例,,加入板孔中的標本,,其中的抗原并不是都有均等的和固相抗結合的機會,只有zui貼近孔壁的一層溶液中的抗原直接與抗體接觸,。這是一個逐步平衡的過程,,因此需經擴散才能達到反應的終點。在其后加入的酶標記抗體與固相抗原的結合也同樣如此,。這就是為什么ELISA反應總是需要一定時間的溫育,。溫育常采用的溫度有43℃、37℃,、室溫和4℃(冰箱溫度)等,。37℃是實驗室中常用的保溫溫度,也是大多數(shù)抗原抗體結合的合適溫度。在建立ELISA方法作反應動力學研究時,,實驗表明,,兩次抗原抗體反應一般在37℃經1-2小時,產物的可達,。為加速反應,,可提高反應的溫度,有些試驗在43℃進行,,但不宜采用更高的溫度,。抗原抗體反應4℃更為*,,在放射免疫測定中多使反應在冰箱中過夜,,以形成zui多的沉淀。但因所需時間太長,,在ELISA中一般不予采用,。保溫的方式除有的ELISA儀器附有特制的電熱塊外,一般均采用水浴,,可將ELISA板置于水浴箱中,,ELISA板底應貼著水面,使溫度迅速平衡,。為避免蒸發(fā),,板上應加蓋,也可用塑料貼封紙或保鮮膜覆蓋板孔,,此時可讓反應板漂浮在水面上,。若用保溫箱,ELISA板應放在濕盒內,,濕盒要選用傳熱性良好的材料如金屬等,,在盒底墊濕的紗布,zui后將ELISA板放在濕紗布上,。濕盒應先放在保溫箱中預溫至規(guī)定的溫度,,特別是在氣溫較低的時候更應如此。無論是水浴還是濕盒溫育,,反應板均不宜疊放,以保證各板的溫度都能迅速平衡,。室溫溫育的反應,,操作時的室溫應嚴格限制在規(guī)定的范圍內,標準室溫溫度是指20-25℃,,但具體操作時可根據說明書的要求控制溫育。室溫溫育時,ELISA板只要平置于操作臺上即可,。應注意溫育的溫度和時間應按規(guī)定力求準確,。為保證這一點,一個人操作時,,一次不宜多于兩塊板同時測定,。
NGAL,ELISA試劑盒,人中性粒細胞明膠酶相關脂質運載蛋白