詳細介紹
人ANF ELISA試劑盒
產(chǎn)品別名:人心納素ELISA試劑盒
英文名稱:Human atrial natriuretic factor,ANF ELISA KIT
產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T
檢測方法:ELISA酶聯(lián)免疫
產(chǎn)品用途: 科研ELISA檢測試劑盒
檢測原理: 采用雙抗體夾心ABC-ELISA法
保存:2-8℃
ELISA試驗時,,注意事項如下:
1.正式試驗時,應分別以陽性對照與陰性對照控制試驗條件,,待檢樣品應作一式二份,,以保證實驗結(jié)果的準確性。有時本底較高,,說明有非特異性反應,,可采用羊血清、兔血清或BSA等封閉,。
2.在ELISA中,,進行各項實驗條件的選擇是很重要的,其中包括:
?。?)固相載體的選擇:許多物質(zhì)可作為固相載體,,如聚氯乙烯、聚苯乙烯,、聚丙酰胺和纖維素等,。其形式可以是凹孔平板、試管,、珠粒等,。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體,在使用前均可進行篩選:用等量抗原包被,,在同一實驗條件下進行反應,,觀察其顯色反應是否均一性,據(jù)此判明其吸附性能是否良好,。
?。?)包被抗體(或抗原)的選擇:將抗體(或抗原)吸附在固相載體表面時,要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0~9.6之間,。吸附溫度,,時間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃18~24小時。蛋白質(zhì)包被的zui適濃度需進行滴定:即用不同的蛋白質(zhì)濃度(0.1,、1.0和10μg/ml等)進行包被后,,在其它試驗條件相同時,觀察陽性標本的OD值,。選擇OD值zui大而蛋白量zui少的濃度,。對于多數(shù)蛋白質(zhì)來說通常為1~10μg/ml。
?。?)酶標記抗體工作濃度的選擇:首先用直接ELISA法進行初步效價的滴定(見酶標記抗體部份),。然后再固定其它條件或采取“方陣法”(包被物、待檢樣品的參考品及酶標記抗體分別為不同的稀釋度)在正式實驗系統(tǒng)里準確地滴定其工作濃度,。
?。?)酶的底物及供氫體的選擇:對供氫體的選擇要求是價廉、安全,、有明顯地顯色反應,,而本身無色。有些供氫體(如OPD等)有潛在的致癌作用,,應注意防護,。有條件者應使用不致癌、靈敏度高的供氫體,,如TMB和ABTS是目前較為滿意的供氫體,。底物作用一段時間后,應加入強酸或強堿以終止反應,。通常底物作用時間,,以10-30分鐘為宜。底物使用液必須新鮮配制,,尤其是H2O2在臨用前加入,。
ANF,ELISA試劑盒,心納素