詳細介紹
sTNFαR,人可溶性腫瘤壞死因子α,腫瘤壞死因子
產(chǎn)品名稱:人sTNFαR ELISA試劑盒
產(chǎn)品別名:人可溶性腫瘤壞死因子α受體ELISA試劑盒
英文名稱:Human soluble Tumor Necrosis Factorαreceptor,sTNFαR ELISA KIT
產(chǎn)品規(guī)格:96T/48T
ELISA關鍵步驟為以下幾點:
1,、盡量用八道或者十二道移液器加樣。對于相同的試劑,,經(jīng)如二抗,,酶,顯色液,,終止液等,。
2、自己的樣品,,因為每一孔的樣品不一樣,,用排槍加有些麻煩,如果一次的樣品比較少,,而自己加樣又比較快,,可以一個孔一個孔的加,但如果想一次把96或者48T的做完,,可以先擺好一些PCR管或者準備一個96孔細胞培養(yǎng)板,。將自己的樣品先加到PCR管或者培養(yǎng)板中(此板間距與酶板板相同)。記得加一定的余量,,如一次加樣是50ul,,可以先加70ul,。加完后再用排槍加樣,這樣可以縮短加樣時間,,減小每個孔間的時間誤差,。
3、如果有多余的孔,,標準品孔可以做復孔,,在自己的樣品前加一次標準品,加完樣品后再加一次標準品,。如果孔不夠,,那么可以將標準品放在樣品中間加。
操作步驟:
1. 使用前,,將所有試劑充分混勻,。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫,以免加樣時加入大量的氣泡,,產(chǎn)生加樣上的誤差,。
2. 根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標準品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標準品和空白孔建議做復孔,。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定,,能使用復孔的盡量做復孔。標本用標本稀釋液1:1稀釋后加入50ul于反應孔內(nèi),。
3. 加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔,、加入待測樣品50ul于反應孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標記的抗體,。蓋上膜板,,輕輕振蕩混勻,37℃溫育1小時,。
4. 甩去孔內(nèi)液體,,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,,甩去洗滌液,,用吸水紙拍干。重復此操作3次,。如果用洗板機洗滌,,洗滌次數(shù)增加一次。
5. 每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘,。
6. 甩去孔內(nèi)液體,,每孔加滿洗滌液,,振蕩30秒,甩去洗滌液,,用吸水紙拍干,。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌,,洗滌次數(shù)增加一次,。
7. 每孔加入底物A、B各50ul,,輕輕振蕩混勻,,37℃溫育10分鐘。避免光照,。
8. 取出酶標板,,迅速加入50ul終止液,加入終止液后應立即測定結果,。
9. 在450nm波長處測定各孔的OD值,。
sTNFαR,人可溶性腫瘤壞死因子α,腫瘤壞死因子