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大鼠淋巴細(xì)胞因子ELISA試劑盒
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大鼠淋巴細(xì)胞因子ELISA試劑盒”操作步驟實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前,，請(qǐng)?zhí)崆芭渲煤盟性噭?，試劑或樣品稀釋時(shí)，均需混勻,，混勻時(shí)盡量避免起泡。每次檢測(cè)都應(yīng)該做標(biāo)準(zhǔn)曲線,。如樣品濃度過(guò)高時(shí)，用樣品稀釋液進(jìn)行稀釋,，以使樣品符合試劑盒的檢測(cè)范圍。
1. 加樣：分別設(shè)空白孔,、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔,?？瞻卓准訕悠废♂屢?00μl,，余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100μl,，注意不要有氣泡,，加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,，盡量不觸及孔壁,，輕輕晃動(dòng)混勻,，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜，37℃反應(yīng)120分鐘,。
為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性,，每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
2. 棄去液體,，甩干,，不用洗滌。每孔加生物素標(biāo)記抗體工作液 100μl（取1μl生物素標(biāo)記抗體加99μl生物素標(biāo)記抗體稀釋液的比例配制,，輕輕混勻,，在使用前一小時(shí)內(nèi)配制），37℃,60分鐘,。
3. 溫育60分鐘后,，棄去孔內(nèi)液體，甩干,，洗板3次,，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔,，甩干,。
4. 每孔加辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素工作液（同生物素標(biāo)記抗體工作液） 100μl，37℃,，60分鐘,。
5. 溫育60分鐘后,，棄去孔內(nèi)液體，甩干,，洗板5次,，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔,，甩干,。
6. 依序每孔加底物溶液90μl，37℃避光顯色（30分鐘內(nèi),，此時(shí)肉眼可見(jiàn)標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度藍(lán)色,，后3-4孔梯度不明顯，即可終止）,。
7. 依序每孔加終止溶液50μl,，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同,。為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性,，底物反應(yīng)時(shí)間到后應(yīng)盡快加入終止液。
8. 用酶聯(lián)儀在450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的光密度（OD值）,。 在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行檢測(cè),。
注：
1. 用戶在初次使用試劑盒時(shí)，應(yīng)將各種試劑管離心數(shù)分鐘,，以便試劑集中到管底,。
2. 每次實(shí)驗(yàn)留一孔作為空白調(diào)零孔，該孔不加任何試劑,，只是zui后加底物溶液及2N H2SO4,。測(cè)量時(shí)先用此孔調(diào)OD值至零。
3. 為防止樣品蒸發(fā),，試驗(yàn)時(shí)將反應(yīng)板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi),，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜。
4. 未使用完的酶標(biāo)板或者試劑,，請(qǐng)于2-8℃保存,。標(biāo)準(zhǔn)品、生物素標(biāo)記抗體工作液,、辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素工作液請(qǐng)依據(jù)所需的量配置使用,。請(qǐng)勿重復(fù)使用已稀釋過(guò)的標(biāo)準(zhǔn)品、生物素標(biāo)記抗體工作液或,、辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素工作液,。
5. 建議檢測(cè)樣品時(shí)均設(shè)雙孔測(cè)定，以保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性,。
“
”可檢測(cè)樣本：血液標(biāo)本,，組織液標(biāo)本,，尿液標(biāo)本，糞便標(biāo)本,，腦脊液標(biāo)本,，胸腹水標(biāo)本等（具體詳細(xì)情況請(qǐng)咨詢）。