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大鼠褪黑素(MT)ELISA試劑盒

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  • 大鼠褪黑素(MT)ELISA試劑盒

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  • 型號 SU-B30813
  • 品牌 其他品牌
  • 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)商
  • 所在地 上海市

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更新時間:2024-12-14 13:32:12瀏覽次數(shù):1091

聯(lián)系我們時請說明是化工儀器網(wǎng)上看到的信息,,謝謝!

產(chǎn)品簡介

供貨周期 現(xiàn)貨    
大鼠褪黑素(MT)ELISA試劑盒用于體外定量檢測血清,、血漿、組織勻漿及相關(guān)液體樣本中大鼠褪黑素(MT)的含量,。

詳細(xì)介紹

本試劑盒用于體外定量檢測血清,、血漿、組織勻漿及相關(guān)液體樣本大鼠褪黑素MT)的含量,。

有效期:6個月

保存條件:2-8℃

本試劑盒僅供科研使用,,不得用于臨床診斷

 

實驗原理

試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)。往預(yù)先包被大鼠褪黑素(MT)捕獲抗體的包被微孔中,,依次加入標(biāo)本,、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測抗體,,經(jīng)過溫育并*洗滌,。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的大鼠褪黑素(MT)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),,計算樣品濃度,。

 

樣本處理及要求

1.  血清將收集于血清分離管的全血標(biāo)本在室溫放置2小時或4℃過夜,然后1000×g離心20 分鐘,,取上清即可,,或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融,。
2.  血漿用EDTA或肝素作為抗凝劑采集標(biāo)本,,并將標(biāo)本在采集后的30分鐘內(nèi)于2-8℃ 1000×g離心15分鐘,取上清即可檢測,,或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存,,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
3.  組織勻漿:用預(yù)冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織,,去除殘留血液(勻漿中裂解的紅細(xì)胞會影響測量結(jié)果),,稱重后將組織剪碎,。將剪碎的組織與對應(yīng)體積的PBS(一般按1:9的重量體積比,比如1g的組織樣品對應(yīng)9mL的PBS,,具體體積可根據(jù)實驗需要適當(dāng)調(diào)整,,并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑)加入玻璃勻漿器中,,于冰上充分研磨,。為了進(jìn)一步裂解組織細(xì)胞,可以對勻漿液進(jìn)行超聲破碎,,或反復(fù)凍融,。后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘,取上清檢測,。

4.  細(xì)胞培養(yǎng)物上清或其它生物標(biāo)本:請1000×g離心20分鐘,,取上清即可檢測,或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存,,但應(yīng)避免反復(fù)凍融,。

注:標(biāo)本溶血會影響后檢測結(jié)果,因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項檢測,。

 

需要而未提供的試劑和器材

  • 酶標(biāo)儀(450nm)
  • 高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL,、2-20uL、20-200uL,、200-1000uL
  • 37℃恒溫箱
  • 蒸餾水或去離子水

 

試劑盒組成

 

名稱

96孔配置

48孔配置

備注

微孔酶標(biāo)板

12孔×8條

12孔×4條

標(biāo)準(zhǔn)品

0.3mL*6管

0.3mL*6管

樣本稀釋液

6mL

3mL

檢測抗體-HRP

10mL

5mL

20×洗滌緩沖液

25mL

15mL

按說明書進(jìn)行稀釋

底物A

6mL

3mL

底物B

6mL

3mL

終止液

6mL

3mL

封板膜

2張

2張

說明書

1份

1份

自封袋

1個

1個

1.  標(biāo)準(zhǔn)品濃度依次為:80、40,、20,、10、5,、2.5 pg/mL

2.  經(jīng)過大量正常標(biāo)本檢驗,,標(biāo)本的正常濃度值均在試劑盒提供的檢測范圍內(nèi),實驗過程中直接取50μL樣本上樣即可,。當(dāng)有部分樣本值超過大標(biāo)準(zhǔn)品濃度時,,可用樣本稀釋液將標(biāo)本進(jìn)行適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行實驗。

 

注意事項

  • 嚴(yán)格按照規(guī)定的時間和溫度進(jìn)行溫育以保證準(zhǔn)確結(jié)果,。所有試劑都必須在使用前達(dá)到室溫20-25℃,。使用后立即冷藏保存試劑。
  • 洗板不正確可以導(dǎo)致不準(zhǔn)確的結(jié)果,。在加入底物前確保盡量吸干孔內(nèi)液體,。溫育過程中不要讓微孔干燥掉。
  • 消除板底殘留的液體和手指印,,否則影響OD值,。
  • 底物顯色液應(yīng)呈無色或很淺的顏色,,已經(jīng)變藍(lán)的底物液不能使用。
  • 避免試劑和標(biāo)本的交叉污染以免造成錯誤結(jié)果,。
  • 在儲存和溫育時避免強(qiáng)光直接照射,。
  • 平衡至室溫后再打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。
  • 任何反應(yīng)試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發(fā)的強(qiáng)烈氣體,。任何漂白成分都會破壞試劑盒中反應(yīng)試劑的生物活性,。
  • 不能使用過期產(chǎn)品。
  • 如果可能傳播疾病,,所有的樣品都應(yīng)管理好,,按照規(guī)定的程序處理樣品和檢測裝置。

 

試劑準(zhǔn)備

試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡后方可使用,。

20×洗滌緩沖液的稀釋:蒸餾水按1:20稀釋,,即1份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水。

 

操作步驟

  1.   從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,,剩余板條用自封袋密封放回4℃,。
  2.   設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL,;
  3.   樣本孔中加入待測樣本50μL,;空白孔不加。
  4.   除空白孔外,,標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的檢測抗體100μL,,用封板膜封住反應(yīng)孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min,。
  5.   棄去液體,,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液(350μL),,靜置1min,,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,,如此重復(fù)洗板5次(也可用洗板機(jī)洗板),。
  6.   每孔加入底物A、B各50μL,,37℃避光孵育15min,。
  7.   每孔加入終止液50μL,15min內(nèi),,在450nm波長處測定各孔的OD值,。

 

實驗結(jié)果計算

以所測標(biāo)準(zhǔn)品的OD值為橫坐標(biāo),標(biāo)準(zhǔn)品的濃度值為縱坐標(biāo),,在坐標(biāo)紙上或用相關(guān)軟件繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,,并得到直線回歸方程,,將樣品的OD值代入方程,計算出樣品的濃度,。

 

試劑盒性能

  •  檢測范圍:2.5 pg/mL – 80 pg/mL,。
  •  靈敏度:低檢測濃度小于0.1 pg/mL。
  •  特異性:不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng),。
  •  重復(fù)性:板內(nèi)變異系數(shù)小于10% ,,板間變異系數(shù)小于15% 。

 

說明

由于現(xiàn)有條件及科學(xué)技術(shù)水平尚不能對所有供貨商提供的所有原料進(jìn)行全面的鑒定與分析,,本產(chǎn)品可能存在一定的質(zhì)量技術(shù)風(fēng)險,。

  • 終的實驗結(jié)果與試劑的有效性、實驗者的相關(guān)操作以及當(dāng)時的實驗環(huán)境密切相關(guān),,請務(wù)必準(zhǔn)備充足的標(biāo)本備份,。
  • 不同批次的同一產(chǎn)品可能會有少許差別,如:檢測限,、靈敏度以及顯色時間等,,請依據(jù)試劑盒內(nèi)說明書進(jìn)行實驗操作,網(wǎng)站電子版說明書僅作參考,。
  • 只有全部使用本試劑盒配套試劑才能保證檢測效果,,不能混用其他商的產(chǎn)品。只有嚴(yán)格遵守本試劑盒的實驗說明才會得到*的檢測結(jié)果,。
  • 本公司只對試劑盒本身負(fù)責(zé),,不對因使用該試劑盒所造成的樣本消耗負(fù)責(zé),請使用者使用前充分考慮到樣本的可能使用量,,預(yù)留充足的樣本,。
  • 使用化學(xué)裂解液制備的組織勻漿或細(xì)胞提取液可能會由于某些化學(xué)物質(zhì)的引入導(dǎo)致ELISA實驗結(jié)果偏差。
  • 若樣本為細(xì)胞培養(yǎng)上清,,因該類樣本干擾因素較多,如:細(xì)胞狀態(tài),、細(xì)胞數(shù)量,、采樣時間等,所以可能存在檢測不出的情況,。
  • 某些天然蛋白或重組蛋白,,包括原核及真核重組蛋白,可能因為與本產(chǎn)品所使用的檢測抗體及捕獲抗體不匹配,,而不被檢測出,。

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