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恒遠(yuǎn)技術(shù)為大家專業(yè)提供ELISA實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)
閱讀：865 發(fā)布時(shí)間：2016-1-26上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司為感謝廣大客戶長期以來對(duì)我公司的支持與厚愛,，感謝新老客戶選擇我公司的ELISA試劑盒產(chǎn)品，特此我公司技術(shù)人員為大家*,、專業(yè)提供ELISA實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn),。以下是我公司技術(shù)人員總結(jié)出的小經(jīng)驗(yàn)供大家參考：
1、包被原的性質(zhì)很重要,，蛋白濃度,，是否降解，這關(guān)系到你做出的抗體可不可以被其識(shí)別,，所以保存抗原很重要,，我做重組蛋白時(shí)，前輩都嚴(yán)格警告我一定要在冰浴下緩慢融化就是這個(gè)道理,。還有有的包被原可能不是蛋白,，對(duì)于生物素和脂類物質(zhì)或小分子物質(zhì)我們要事先對(duì)其改造再加以包被，我把方法簡要的列出如下:①親和素生物素:先親和素先包被載體,，加入生物素化的DNA,，這種包被方法均勻、牢固,，已擴(kuò)大應(yīng)用于各種抗原物質(zhì)的定量測(cè)定,。②脂類物質(zhì):可將其在有機(jī)溶劑（例如乙醇）中溶解后加入ELISA板孔中，開蓋置冰箱過ye或冷風(fēng)吹干,，待酒精揮發(fā)后,，讓脂質(zhì)自然干固在固相表面。③小分子必須依靠和大的蛋白載體偶聯(lián)后才能固定在固相載體上,。
2,、包被液的選擇，一般選擇ph9.6的碳酸鹽緩沖液,。但有時(shí)由于試驗(yàn)的需要,，包被原的特殊性也可能采用中性的緩沖溶液來包。應(yīng)注意以下原理：由于蛋白質(zhì)與聚苯乙烯固相載體是通過物理吸附結(jié)合的,，靠的是蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)上的疏水基團(tuán)與固相載體表面的疏水基團(tuán)間的作用,，這種物理吸附是非特異性的，受蛋白質(zhì)的分子量、等電點(diǎn),、濃度等的影響,，大分子蛋白質(zhì)較小分子蛋白質(zhì)通常含有更多的疏水基團(tuán)，故更易吸附到固相載體表面,。具體的試驗(yàn)還要有堅(jiān)固的理論外也要實(shí)踐,，看一下zui終可不可以應(yīng)用到自己試驗(yàn)當(dāng)中去。常用的包被液除了剛才提到的pH9.6碳酸鹽緩沖液,，還有pH7.2的磷酸鹽緩沖液和pH7-8的Tris-HCL緩沖液等等,。
3、封閉：繼包被之后用高濃度的無關(guān)蛋白質(zhì)溶液再包被的過程,。封閉就是讓大量不相關(guān)的蛋白質(zhì)充填這些空隙，從而排斥ELISA后的步驟中干擾物質(zhì)的再吸附,。常用封閉劑有：0.05%-0.5%的BSA,；10%的小牛血清或1%明膠；脫脂奶粉,，比較價(jià)廉,，可以高濃度使用（5%－10％）；還有一些稀有用到的各種動(dòng)物血清（主要為了排除相似蛋白干擾）和酪蛋白等等,。但zui終選用什么,，要依據(jù)試驗(yàn)具體來實(shí)踐。
4,、洗滌板：可以說在ELISA操作中,，洗滌是zui主要的關(guān)鍵技術(shù)。因?yàn)榫郾揭蚁┑人芰蠈?duì)蛋白質(zhì)的吸附是普遍性的,，為達(dá)到分離游離的和結(jié)合的酶標(biāo)記物的目的,，清除殘留在板孔中游離的物質(zhì)，以及非特異性地吸附的干擾物質(zhì),，在洗滌時(shí)又應(yīng)把這種非特異性吸附的干擾物質(zhì)洗滌下來,。所以在洗板時(shí)會(huì)有一定誤差，人為因素很大（當(dāng)然有條件的用洗板機(jī)除外）,，洗的不*或串了孔,，對(duì)如此靈敏的ELISA系統(tǒng)可是不小的影響。
5,、加抗體標(biāo)本(和二抗):注意該換槍頭時(shí)換槍頭,。標(biāo)本稀釋一般可用pbs稀釋，也可用封閉液去稀釋,。如需加二抗,，還要注意二抗的工作濃度，太高浪費(fèi)，太低則著色淺,。
6,、顯色:顯色系統(tǒng)又很多，我們一開始做的時(shí)候,，要選擇適宜的顯色系統(tǒng),。注意顯色系統(tǒng)酶活性底物的保存HRP結(jié)合物加硫柳泵，AP結(jié)合物可加疊氮鈉,。
7,、每次做盡量要把陰陽空三個(gè)對(duì)照做好，如出現(xiàn)問題也好分析,。
我公司主營生物試劑,、標(biāo)準(zhǔn)品、試劑盒,、培養(yǎng)基,、血清、細(xì)胞,、細(xì)胞因子,、抗體等，有任何問題歡迎廣大客戶,！
96T 檢測(cè)84個(gè)樣本,，12孔用于繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線
48T 檢測(cè)42個(gè)樣本，6孔用于繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線
我們對(duì)客戶的承諾：
1.有質(zhì)量問題免費(fèi)包換.（質(zhì)量問題包括運(yùn)輸不當(dāng),，客戶在使用過程中測(cè)不出結(jié)果,，等等！）
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