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 ELISA試驗以靈敏度較高、特異性較好的特點在臨床上得到了廣泛的應(yīng)用,，但操作中的各個環(huán)節(jié)對試驗的檢測效果影響較大,，如不注意，有可能導(dǎo)致顯色不全,、花板等結(jié)果,。我將操作中各個環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)于下，以期給同行帶來一些啟發(fā),，提高試驗質(zhì)量,。

操作步驟	可能原因	解決辦法
選擇試劑	選擇質(zhì)量優(yōu)良的檢測試劑，嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行操作,，操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘,。
加   樣	1過長（特別是室內(nèi)溫度較高時）； 3.加完標(biāo)本再加酶試劑時酶濺出孔外,。.血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣,； 2.手工操作中，加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間	1.標(biāo)本為血清：將血液先自然存放1-2小時后,，再用3000rmp離心15分鐘,；標(biāo)本為血漿：必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管，采血后必須立即顛倒采血管混合5-10次,，放置一段時間后,，3000rpm離心15分鐘；若在幾天內(nèi)檢測,，可放在2-8℃冰箱中,，若要貯存，則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi),。 2.加樣后及時放入孵箱,。 3.加酶試劑后用吸水紙在酶標(biāo)板表面輕拭吸干,。 4.如果采用AT或其他全自動加樣，選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑,。 5.標(biāo)本較多時,，請分批操作。
孵   育	1.孵育時未貼封片或加蓋,，使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā),，吸附于孔壁，難于清洗*,； 2.孵育時間人為延長,，導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍，難以清洗*,。	1.貼封片或加蓋,； 2.按說明步驟嚴(yán)格控制操作時間。
洗   板	1.采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉,。 2.采用半自動洗板機(jī)洗板時,，洗液量不足，導(dǎo)致洗板不*,；洗板針堵塞,，抽吸不*；洗板不暢,，導(dǎo)致洗板效果差,。 3.反應(yīng)板過多造成洗板等待時間長。	1.保證洗液注滿各孔,，洗板針暢通,，洗完板后在吸水紙（選擇干凈、無或少塵的吸水材料）上輕輕拍干,； 2.合理安排,，或多用幾臺洗板機(jī)。
顯   色	1. 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑,； 2. 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流,。	1. 顯色劑盡量在臨用前配制，堅持不用過期顯色劑,，肉眼可見淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用,； 2. 加樣時保持顯色劑不外流； 3.A,、B液應(yīng)避免接觸金屬器械,。
終   止	加終止液時產(chǎn)生較多氣泡，導(dǎo)致假陽性增加。	加終止液時應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡,。
讀   板	讀板時板底不清潔,。	應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔,。
全過程	1.整個操作過程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸; 2.實現(xiàn)ELISA檢測標(biāo)準(zhǔn)自動化,，有效提高檢測質(zhì)量。