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黃曲霉毒素B1的實(shí)驗(yàn)步驟
閱讀：656 發(fā)布時(shí)間：2012-10-23| 提 供 商 | 上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司 | 資料大小 | 21.5KB |
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黃曲霉毒素B1的實(shí)驗(yàn)步驟
、自備物品微孔板酶標(biāo)儀（含450nm）、振蕩器、粉碎機(jī)、微量移液器,、量筒、漏斗,、容量瓶,、快速定性濾紙、氯化鈉（分析純）,、甲醇（分析純）,、去離子水或蒸餾水。
樣品處理 取5g粉碎的有代表性的樣品,，加1.25g氯化捺及250mL70%甲醇溶液,，強(qiáng)力振蕩3min，用快速定性濾紙過濾,。取50μL稀釋液進(jìn)行分析,。根據(jù)需要可以增加樣品量，但甲醇溶液的量也應(yīng)相應(yīng)增加,。
實(shí)驗(yàn)步驟
1試劑盒平衡至室溫,。取所需數(shù)量的板條插入微孔架，記錄樣品及標(biāo)準(zhǔn)的位置,。
2加入50μL標(biāo)準(zhǔn)品或處理好的樣品到微孔,，每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)和樣品必須使用新的吸頭。
3加入50μL抗AF B1單克隆抗體使用液到每個(gè)微孔,，37℃避光孵育90min,。
4甩掉空中液體，用洗液洗滌微孔板3min×3次,，zui后一次應(yīng)在吸水紙上拍打以*除去孔中液體,。
5每孔加入酶標(biāo)物100μL，37℃避光孵育60min,。
6用洗液洗滌微孔板3min×3次,，zui后一次應(yīng)在吸水紙上拍打已*除去孔液體。
7沒空加入顯色液100μL（2滴）,，37℃避光孵育10min,。
8每孔加入終止液50μL（1滴），立即用酶標(biāo)儀在波長450nm處測(cè)定吸光度值（OD）值,。
測(cè)定
1目測(cè)法：未加終止液前目測(cè),。比較樣品孔與標(biāo)準(zhǔn)1的微孔顏色，若淺,，則為陽性,；若深，則為陰性,；顏色接近則需用酶標(biāo)儀測(cè)吸光度值比較,。
2儀器法：用酶標(biāo)儀在450nm波長處測(cè)定吸光度值。