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上海恒遠(yuǎn)提供：植物赤霉素（GA3）說明書
閱讀：1222 發(fā)布時間：2012-6-26植物赤霉素（GA3）酶聯(lián)免疫分析
試劑盒使用說明書
本試劑盒僅供研究使用,。
檢測范圍： 96T
20pg/ml - 480 pg/ml
使用目的：
本試劑盒用于測定植物組織,、細(xì)胞及相關(guān)液體樣本中赤霉素（GA3）含量。
實驗原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中植物赤霉素（GA3）水平,。用純化的植物赤霉素
（GA3）抗體包被微孔板,，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入赤霉素（GA3）,，再與
HRP 標(biāo)記的赤霉素（GA3）抗體結(jié)合,，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底
物 TMB顯色,。TMB 在HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。
顏色的深淺和樣品中的赤霉素（GA3）呈正相關(guān),。用酶標(biāo)儀在 450nm 波長下測定吸光度（OD
值）,，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中植物赤霉素（GA3）濃度。
試劑盒組成
1 30倍濃縮洗滌液 20ml×1瓶 7 終止液 6ml×1 瓶
2 酶標(biāo)試劑 6ml×1瓶 8 標(biāo)準(zhǔn)品（960 pg/mL） 0.5ml×1 瓶
3 酶標(biāo)包被板 12 孔×8條 9 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 1.5ml×1 瓶
4 樣品稀釋液 6ml×1瓶 10 說明書 1 份
5 顯色劑A 液 6ml×1瓶 11 封板膜 2 張
6 顯色劑B液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1 個
標(biāo)本要求
1．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實驗。若不能
馬上進(jìn)行試驗,，可將標(biāo)本放于-20℃保存,，但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性,。
操作步驟
1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀
釋。
480pg/mL 5 號標(biāo)準(zhǔn)品 150µl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150µl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
240pg/mL 4 號標(biāo)準(zhǔn)品 150µl的5 號標(biāo)準(zhǔn)品加入150µl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
120pg/mL 3 號標(biāo)準(zhǔn)品 150µl的4 號標(biāo)準(zhǔn)品加入150µl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
60pg/mL 2 號標(biāo)準(zhǔn)品 150µl的3 號標(biāo)準(zhǔn)品加入150µl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
30pg/mL 1 號標(biāo)準(zhǔn)品 150µl的2 號標(biāo)準(zhǔn)品加入150µl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,，其余各步操作相同） ,、標(biāo)準(zhǔn)孔、
待測樣品孔,。 在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50µl,， 待測樣品孔中先加樣品稀釋液40µl，然后再加待測樣品10µl（樣品zui終稀釋度為5倍）,。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,，盡
量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻,。
3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘,。
4. 配液：將30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水30 倍稀釋后備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體,，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去,，如此
重復(fù) 5次,，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50µl,，空白孔除外,。
7. 溫育：操作同3。
8. 洗滌：操作同5,。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50µl,，再加入顯色劑B50µl，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色
15 分鐘.
10. 終止：每孔加終止液 50µl,，終止反應(yīng)（此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色） 。
11. 測定：以空白空調(diào)零,，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD 值） ,。 測定應(yīng)在加終止
液后 15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
操作程序總結(jié)：
計算
以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),，OD 值為縱坐標(biāo),，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的
OD 值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度,；再乘以稀釋倍數(shù),；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD 值計算出標(biāo)
準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式， 將樣品的OD值代入方程式,， 計算出樣品濃度,， 再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度,。
注意事項
1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用,，酶標(biāo)包被板開封后如未
用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存,。
2．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果,。
3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器,，并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性，以避免試驗誤差,。一次加樣時間
控制在5 分鐘內(nèi),，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣,。
4． 請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線,，做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD 值
大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的OD 值） ，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定,，計
算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5） ,。
5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染,。
6．底物請避光保存,。
7．嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行，試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).
8．所有樣品,，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理,。
9．本試劑不同批號組分不得混用。
10. 如與英文說明書有異,，以英文說明書為準(zhǔn),。
保存條件及有效期
1．試劑盒保存： ；2-8℃,。
2．有效期：6個月
上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司主營產(chǎn)品/服務(wù):ELISA試劑盒,，免疫組化試劑盒，放免試劑盒,，標(biāo)準(zhǔn)品,，血清，抗體,，培養(yǎng)基,，細(xì)胞，生物試劑,，實驗耗材等 公司秉承“專注品質(zhì),、信守承諾、積極溝通,、創(chuàng)新服務(wù)”的企業(yè)文化積極參與生物領(lǐng)域的技術(shù)創(chuàng)新和技術(shù)服務(wù),，力求為我國科研事業(yè)添磚加瓦。