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恒遠產(chǎn)品文獻:TGF－β１ELISA試劑盒在文獻中的引用
閱讀：572 發(fā)布時間：2019-11-29高糖對大鼠腹膜間皮細胞分泌細胞因子的影響及苦參堿的干預(yù)作用
朱士彥１,，甘 平２,，廖 彧１,，巫建芳１，龍貴華１
（１．廣東省佛山市順德區(qū)龍江醫(yī)院腎內(nèi)科 ５２８３１８,；２．貴陽醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院腎內(nèi)科,，貴陽 ５１００００）
［摘要］ 目的 研究高糖刺激下大鼠腹膜間皮細胞分泌腫瘤壞死因子α（ＴＮＦ－α）和轉(zhuǎn)化生長因子β１（ＴＧＦ－β１）及苦參堿的干預(yù)作用，探討腹膜纖維化發(fā)生機制,。方法 通過體外培養(yǎng)大鼠腹膜間皮細胞（ＰＭＣｓ）,，依據(jù)加入藥物濃度分成５組：２．５％葡萄糖組（ｎ＝１５，Ａ 組）,；低糖苦參堿組（２．５％葡萄糖,，ｎ＝１５，Ｂ組）,；４．２５％葡萄糖組（ｎ＝１５,，Ｃ組）；高糖 苦 參 堿 組（４．２５％葡萄 糖,，ｎ＝１５,，Ｄ組）；對照組（ｎ＝１５,，Ｅ 組,，僅加不含血清的 ＤＭＥＭ－Ｆ１２ＢＭＳＣ 培養(yǎng) 基），分別 于 第 ２４,、４８,、７２小時收集培養(yǎng)上清液,，采用ＥＬＩＳＡ 法測定各組培養(yǎng)上清液中 ＴＮＦ－α和 ＴＧＦ－β１ 濃度 的 變 化，同時觀察各組大鼠腹膜間皮細胞光鏡下的表現(xiàn),。結(jié) 果 光 鏡下,，可見 Ｅ組和 Ｂ組腹膜間皮細胞小，呈卵圓形或圓形,，生長較為密集,。Ａ、Ｃ,、Ｄ組腹膜間皮細胞大,、呈梭形或多邊形，分布較為稀疏,；在 Ａ 組,，培養(yǎng)上清液中 ＴＮＦ－α和 ＴＧＦ－β１ 水平較 Ｅ組無明顯統(tǒng)計學(xué)變化（Ｐ＞０．０５）；而在Ｃ組,，培養(yǎng)上清液中 ＴＮＦ－α和 ＴＧＦβ１ 水平較 Ｅ組增加明顯,，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（Ｐ＜０．０５）,。在 Ｂ組和 Ｄ組中,，ＰＭＣｓ分泌 ＴＮＦ－α和 ＴＧＦ－β１ 水平 Ｂ組較 Ａ 組減少差異無統(tǒng)計學(xué)意義（Ｐ＞０．０５）；Ｄ組較 Ｃ組明顯下降,，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（Ｐ＜０．５）,。結(jié)論 苦參堿能拮抗高糖致大鼠腹膜間皮細胞分泌 ＴＮＦ－α和 ＴＧＦ－β１，從而保護腹膜間皮細胞,。
［關(guān)鍵詞］ 葡萄糖,；苦參堿；腫瘤壞死因子α,；轉(zhuǎn)化生長因子β１,；腹膜間皮細胞腹膜 透 析 （ｐｅｒｉｔｏｎｅａｌｄｉａｌｙｓｉｓ，ＰＤ）由于自身生物相容 性好,，中分子物質(zhì)清除效率高等優(yōu)點,，成為目前終末期腎臟疾病的shou選透析方式。但是反復(fù)發(fā)作腹膜炎癥可使有效腹膜透析面積減少,，從而導(dǎo)致腹膜對溶質(zhì)的清除及水分的超濾功能減退甚至功能衰竭,，是部分 ＰＤ患者改行血液透析治療的主要原因之一 ［１］。實驗表明,，腹膜長期處于高滲微環(huán)境,，可終破壞腹膜的整體結(jié)構(gòu)性，葡萄糖及其與機體產(chǎn)生的炎變產(chǎn)物是致 ＰＤ相關(guān)性腹膜超濾衰竭重要原因之一［２－３］,。如何從病理生理學(xué)機制方面深入探究腹膜超濾衰竭的發(fā)病機理,，成為近年來醫(yī)學(xué)研究的重要課題內(nèi)容?，F(xiàn)有研 究 證 實 人 腹 膜 間 皮 細 胞 （ｐｅｒｉｔｏｎｅａｌｍｅｓｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｓ，ＰＭＣｓ）具有多重重要的生理功能,，如分泌,、吸收、修復(fù),、支持等,。在腹膜發(fā)生炎變時，ＰＭＣｓ自身分泌的炎性因子和細胞因子,，又影響到腹膜 自 身 的 修 復(fù)［４－５］,。本研 究 旨 在 探 討 高 糖 致大鼠 ＰＭＣｓ分泌腫 瘤 壞 死 因 子α（ＴＮＦ－α）和轉(zhuǎn) 化 生 長 因 子β１（ＴＧＦ－β１）及苦參堿的抗纖維化作用，為臨床防治腹膜纖維化,，延緩病人的生命,，有著極其重要的現(xiàn)實意義。
１ 材料與方法
１．１ 材 料 選 取 健 康 ＢＡＬＢ／ｃ大 鼠 ３５ 只,，雌 雄 兼 用,，體 重１００～１２０ｇ，同等條件下 飼 養(yǎng),，鼠 齡６～８周,，由貴陽醫(yī)學(xué)院動物實驗中心提供。
１．２ 主要試劑 胎牛血清（ＦＣＳ）,，ＤＭＥＭ－Ｆ１２ＢＭＳＣ培養(yǎng)基,，胰蛋白酶液，卵母細胞裂解液,，ＤＡＢ顯色劑（編號 ＡＲ１０２２）,，抗體稀釋液（編號 ＡＲ１０１６），Ｈａｎｋｓ平衡 鹽 溶 液,，多 聚 賴 氨 酸,，枸櫞酸鹽緩沖液，以上均購自鄭州益康生物工程有限公司,；ＴＮＦ－αＥＬＩＳＡ 試 劑 盒 （上海恒遠生物科技有限公司,，編 號：ＡＲ２０５３）；ＴＧＦ－β１ ＥＬＩＳＡ 試劑 盒（上海恒遠生物科技有限公司,，編號：ＡＲ２０９５）,；即用型 ＳＡＢＣ 免疫組化染色試劑盒（上海恒遠生物科技有限公司，編號：ＳＡ１０２０）,；兔抗人細胞角蛋白１８抗體,、抗人波形蛋白（上海聯(lián)碩生物科技有限公司）；兔抗 人 第Ⅷ因子相關(guān)抗原抗體（上海聯(lián)碩生物科技有限公司）,；２．５％,、４．２５％腹膜透析液２Ｌ（廣州 百 特 公 司）,；苦參 堿 注 射 液，每 支１５０ｍｇ（１０ ｍＬ）,，山西振東泰盛制藥有限公司,，批 號Ｈ２００５９３３５。
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