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                                                      ELISA試劑盒操作步驟

方法一　用于檢測未知抗原的雙抗體夾心法:

　　1.　包被：用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1～10μg／ml,。在每個聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加0.1ml，4℃ 過夜,。次日，棄去孔內(nèi)溶液,，用洗滌緩沖液洗3次,，每次3分鐘。（簡稱洗滌，下同）,。

　　2.　加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,，置37℃ 孵育1小時,。然后洗滌,。（同時做空白孔,，陰性對照孔及陽性對照孔）,。

　　3.　加酶標抗體：于各反應(yīng)孔中,，加入新鮮稀釋的酶標抗體（經(jīng)滴定后的稀釋度）0.1ml。37℃ 孵育0.5～1小時,，洗滌。

　　4.　加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml,，37℃ 10～30分鐘。

　　5.　終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml,。

　　6.　結(jié)果判定：可于白色背景上,，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深，陽性程度越強,，陰性反應(yīng)為無色或極淺，依據(jù)所呈顏色的深淺,，以“+”,、“-”號表示。也可測OD值：在ELISA檢測儀上,，于450nm（若以ABTS顯色,，則410nm）處，以空白對照孔調(diào)零后測各孔OD值,，若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍,，即為陽性。

　　方法二　用于檢測未知抗體的間接法：

　　用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1～10μg／ml,，

　　每孔加0.1ml,，4℃過夜。次日洗滌3次,。

　　↓

　　加一定稀釋的待檢樣品（未知抗體）0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔

　　中,置37℃孵育1小時,洗滌,。（同時做空白、陰性及陽性孔對照）

　　↓

　　于反應(yīng)孔中,，加入新鮮稀釋的酶標第二抗體（抗抗體）0.1ml,，

　　37℃孵育30-60分鐘，洗滌,zui后一遍用DDW洗滌,。

　　↓

　　其余步驟同“雙抗體夾心法”的4、5,、6,。

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