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ELISA操作步驟圖解
閱讀：815 發(fā)布時間：2015-5-13| 提 供 商 | 上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司 | 資料大小 | 15.6KB |
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實(shí)驗(yàn)開始前,，各試劑均應(yīng)平衡至室溫(試劑不能直接在37℃溶解),；試劑或樣品稀釋時，均需混勻,，混勻時盡量避免起泡,。實(shí)驗(yàn)前應(yīng)預(yù)測樣品含量，如樣品濃度過高時,，應(yīng)對樣品進(jìn)行稀釋,，以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測范圍，計(jì)算時再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù),。
1.加樣：分別設(shè)空白孔,、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔,?？瞻卓准訕悠废♂屢?00μl，余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品100μl,，注意不要有氣泡,，加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻,，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜,，37℃反應(yīng)120分鐘。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性,，每次實(shí)驗(yàn)請使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液,。
2.棄去液體，甩干,，不用洗滌,。每孔加檢測溶液A工作液 100μl(在使用前一小時內(nèi)配制)，酶標(biāo)板加上覆膜, 37℃反應(yīng)60分鐘,。
3.溫育60分鐘后,，棄去孔內(nèi)液體，甩干,，洗板3次,，每次浸泡1-2分鐘，大約400μl/每孔,，甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干),。
4.每孔加檢測溶液B工作液(同檢測A工作液) 100μl，酶標(biāo)板加上覆膜37℃反應(yīng)60分鐘,。
5.溫育60分鐘后,，棄去孔內(nèi)液體，甩干,，洗板5次,，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔,，甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干),。
6.依序每孔加底物溶液90μl，酶標(biāo)板加上覆膜37℃避光顯色(30分鐘內(nèi),，此時肉眼可見標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色,，后3-4孔梯度不明顯，即可終止),。
7.依序每孔加終止溶液50μl,，終止反應(yīng)，此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色,。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同,。為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，底物反應(yīng)時間到后應(yīng)盡快加入終止液。
8.用酶聯(lián)儀在450nm波長依序測量各孔的光密度(OD值),。 在加終止液后立即進(jìn)行檢測,。