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解密胎牛血清操作疑難總匯
閱讀：1064 發(fā)布時(shí)間：2015-4-9| 提 供 商 | 上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司 | 資料大小 | 6.3KB |
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解密胎牛血清操作疑難總匯
將血清從冷凍箱取出后，先置于2～8℃冰箱使之融解,，然后在室溫下使之全融,。但必須注意的是，融解過(guò)程中必須規(guī)則地?fù)u晃均勻,。
長(zhǎng)時(shí)間儲(chǔ)存在2-8℃時(shí),，血清中的各種蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纖維蛋白原,、玻粘連蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可見(jiàn)的混濁,。因此，推薦在-20℃以下儲(chǔ)存血清,，并避免反復(fù)凍融,。
我們建議血清應(yīng)保存在-2O℃。若存放于4℃時(shí),，請(qǐng)勿超過(guò)一個(gè)月,。若一次無(wú)法用完一瓶，建議無(wú)菌分裝血清至恰當(dāng)?shù)臏缇萜鲀?nèi),，再放回冷凍,。
2、血清中包含絮狀沉淀,，它們是什么,，怎么處理?
沉淀包含纖維蛋白和脂蛋白。這是正常特性,，不會(huì)影響產(chǎn)品性質(zhì),。要除去沉淀,，離心血清(400g，1-2分鐘)或者簡(jiǎn)單的讓其沉淀在瓶子底部,，將血清小心的轉(zhuǎn)移到另一個(gè)無(wú)菌瓶里(一般不建議采用過(guò)濾的方法除去沉淀,，因?yàn)槌恋頃?huì)堵塞濾膜而無(wú)法過(guò)濾)。大多情況輕輕搖動(dòng)沉淀并加熱至37℃就會(huì)再溶解,。所以,，使用產(chǎn)品時(shí)要搖動(dòng)并加熱血清至37℃，沉淀會(huì)自然消失,。
3,、 如何避免血清中產(chǎn)生沉淀?
按如下操作可避免沉淀的產(chǎn)生：
(1)解凍血清時(shí)，請(qǐng)隨時(shí)將之搖晃均勻,，使溫度及成分均一,，減少沉淀的發(fā)生。
(2) 血清分裝凍存時(shí),，須規(guī)則搖晃均勻(小心勿造成氣泡),，使溫度與成分均一。
(3) 勿直接由-20℃直接至37℃解凍,，因溫度改變太大,，容易造成蛋白質(zhì)凝結(jié)而發(fā)生沉淀。
(4) 勿將血清置于37℃太久,，否則血清會(huì)變得渾濁,，同時(shí)血清中許多較不穩(wěn)定的成份也會(huì)因此受到破壞，從而影響血清的品質(zhì),。
(5) 血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多,，若非必要，可以無(wú)須做此步驟,。
(6) 若必須做血清的熱滅活,，請(qǐng)遵守56℃，30分鐘的原則,，并且隨時(shí)搖晃均勻,。溫度過(guò)高，時(shí)間過(guò)久或搖晃不均勻,，都會(huì)造成沉淀物的增多,。
5、 為什么要熱滅活血清?
加熱可以滅活補(bǔ)體系統(tǒng),。激活的補(bǔ)體參與溶解細(xì)胞事件,，刺激平滑肌收縮，細(xì)胞和血小板釋放組胺，激活淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞,。在免疫學(xué)研究,，培養(yǎng)ES細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞時(shí),，推薦使用熱滅活血清,。
6、 有必要做熱滅活嗎?
實(shí)驗(yàn)顯示,，經(jīng)過(guò)正確處理的熱滅活血清,，對(duì)大多數(shù)的細(xì)胞而言是不需要的。經(jīng)此處理過(guò)的血清對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)只有微小的促進(jìn),，或*沒(méi)有任何作用,，甚至通常因?yàn)楦邷靥幚碛绊懥搜宓馁|(zhì)量，而造成細(xì)胞生長(zhǎng)速率的降低,。而經(jīng)過(guò)熱處理的血清,，沉淀物的形成會(huì)顯著的增多，這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀察,，像是“小黑點(diǎn)"，常常會(huì)讓研究者誤以為是血清遭受污染,，而把血清放在37℃環(huán)境中,，又會(huì)使此沉淀物更增多，使研究者誤認(rèn)為是微生物的分裂擴(kuò)增,。
若非必須,，可以不需要做熱處理這一步。不但節(jié)省時(shí)間,，更確保血清的質(zhì)量!
7,、 培養(yǎng)基中添加了血清和抗生素后，可長(zhǎng)期保存嗎?
一旦您在新鮮培養(yǎng)基中添加了血清和抗生素時(shí),，您應(yīng)該在兩到三周內(nèi)使用它,。因?yàn)橐恍┛股睾脱逯械幕境煞衷诮鈨龊缶烷_(kāi)始降解。
8,、 細(xì)胞培養(yǎng)中如何防止黑點(diǎn)?
(1) 盡可能地減少血清凍融次數(shù),。
(2) 培養(yǎng)基無(wú)需37℃水浴。
(3) 培養(yǎng)基保持*PH值7.0- 7.2,。
(4) 嚴(yán)格控制配制培養(yǎng)基的水質(zhì),，容器定期刷洗。
(5) 掌握細(xì)胞傳代的*時(shí)機(jī),，細(xì)胞切勿生長(zhǎng)過(guò)老,。
9、小牛血清和胎牛血清有何區(qū)別與注意事項(xiàng)?
來(lái)源不同：胎牛血清(Fetal Bovine Serum ,FBS) 是在屠宰懷孕母牛的時(shí)候,通過(guò)心臟穿刺采血獲取的胎牛的血清,，新生牛(小牛)血清(Calf serum, CS)采自出生10至14 天的小牛,。
組份與比例不同：兩者所含的促細(xì)胞生長(zhǎng)因子,、促貼附因子、激素及其他活性物質(zhì)等組份與比例不同,，用途與用法不同：某些細(xì)胞必需胎牛血清才能生長(zhǎng),，而有些細(xì)胞只需小牛血清即可，使用濃度不同,，一般在5%-10%,，有特殊要求的濃度在20%。
血清保存和使用須注意：血清應(yīng)保存在-5℃至-20℃,，若存放在4℃不可超過(guò)一個(gè)月,。解凍血清時(shí) ，應(yīng)先將血清至于2-8℃冰箱,，并經(jīng)常搖勻使之溶解,，然后至室溫放置使之升溫，不可將冷凍的血清直接放入37℃水浴或者溫箱中,，如放在37℃解凍,，顏色加深，粘稠度也會(huì)增加,，血清在解凍和熱滅活后,，應(yīng)按用量分裝并于-20℃保存，避免反復(fù)凍融,。
10,、細(xì)胞培養(yǎng)中出現(xiàn)黑點(diǎn)是污染嗎?如何處理?
一旦您在細(xì)胞培養(yǎng)的過(guò)程中發(fā)現(xiàn)有黑點(diǎn)，首先,，要肉眼觀察培養(yǎng)基是否混濁,，然后，在鏡下觀察培養(yǎng)細(xì)胞生長(zhǎng)的狀態(tài),，黑點(diǎn)是否游動(dòng),。如果細(xì)胞被污染，微生物則會(huì)大量繁殖,，培養(yǎng)基就會(huì)迅速變黃,、變混濁。污染包括細(xì)菌污染,、支原體污染等,。
如果在鏡下觀察細(xì)胞，生長(zhǎng)狀態(tài)良好,，與黑點(diǎn)出現(xiàn)前相比,，沒(méi)有任何變化，那么，黑點(diǎn)的出現(xiàn)可能與以下幾種情況有關(guān)：
(1)細(xì)胞生長(zhǎng)過(guò)老,，破碎的細(xì)胞殘骸;
(2)血清質(zhì)量不好,，反復(fù)凍融的結(jié)果;
(3)配制培養(yǎng)基的pH值偏高，不宜細(xì)胞生長(zhǎng);
(4)配制培養(yǎng)基的水質(zhì),、容器不合格,。可應(yīng)用離心,、過(guò)濾的方法去除這些黑點(diǎn);
(5)培養(yǎng)原代細(xì)胞中出現(xiàn)小黑點(diǎn),，可能是原代組織中的雜質(zhì)，多次傳代可以消除,。