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ELISA測(cè)定步驟如何進(jìn)行波長(zhǎng)比色
閱讀：5710 發(fā)布時(shí)間：2016-5-11盡管ELISA測(cè)定的操作步驟非常簡(jiǎn)單,，但有可能會(huì)影響測(cè)定結(jié)果的因素卻較多,，分布在測(cè)定操作的各步之中,。本節(jié)內(nèi)容就波長(zhǎng)比色問(wèn)題展開討論,。
比色要注意波長(zhǎng)的選擇,。以TMB為底物和以O(shè)PD為底物的試劑盒均有使用，而前者比色波長(zhǎng)為450nm,，后者為492nm,，濾光片需根據(jù)要求隨時(shí)更換。因此,，容易出現(xiàn)濾光片錯(cuò)用的問(wèn)題,。
其次，單波長(zhǎng)或雙波長(zhǎng)比色選擇的問(wèn)題,。所謂的單波長(zhǎng)比色即是通常的以對(duì)顯色具有zui大吸收的波長(zhǎng)如450nm或492nm進(jìn)行比色測(cè)定,；而雙波長(zhǎng)雙色則酶標(biāo)儀在敏感波長(zhǎng)如450nm和非敏感波長(zhǎng)如630nm下各測(cè)定一次，敏感波上下的吸光度測(cè)定值為樣本測(cè)定酶反應(yīng)特異顯色的吸光度與板孔上指紋,、刮痕,、灰塵等臟物所致的吸光度之和；非敏感波長(zhǎng)下測(cè)定即改變波長(zhǎng)至一定值,，使得樣本測(cè)定酶反應(yīng)特異顯色的吸光度值為零,，此時(shí)測(cè)得的吸光度即為臟物的吸光度值。zui后酶標(biāo)儀給出的數(shù)值為敏感波長(zhǎng)下的吸光度值與非常感波長(zhǎng)下的吸光度值的差,。因此,，雙波長(zhǎng)比色測(cè)定具有能排除由微滴板本身、板孔內(nèi)標(biāo)本的非特異吸收,、指紋,、刮痕、灰塵等對(duì)特異顯色測(cè)定吸光度的影響的優(yōu)點(diǎn),。由于ELISA測(cè)定中單個(gè)空白孔的非特異吸收上有一定程度的不確定性,，也就是說(shuō)每次測(cè)定或同次測(cè)定空白孔位置的不同均有可能得到不同吸光度測(cè)定值，故而在ELISA測(cè)定比色時(shí),，是使用雙波長(zhǎng)比色,。