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實(shí)驗(yàn)攻略：ELISA試劑盒檢測(cè)結(jié)果分析方法
閱讀：1946 發(fā)布時(shí)間：2015-11-18 細(xì)節(jié)決定成敗，這對(duì)于實(shí)驗(yàn)室科研工作者來(lái)說(shuō)也是如此,。在ELISA實(shí)驗(yàn)中的各項(xiàng)操作細(xì)節(jié)有很多，如盡量少用排槍,、勤換槍頭，加樣時(shí)由低濃度向高濃度加,，因?yàn)檫@樣可以減少跳孔的幾率,。而整個(gè)實(shí)驗(yàn)的zui后關(guān)鍵就是結(jié)果的處理方法了，那么在在今天的技術(shù)文章中,，上海恒遠(yuǎn)為您帶來(lái)的是ELISA試劑盒檢測(cè)結(jié)果分析方法,。
①：ELISA實(shí)驗(yàn)中樣品都要做復(fù)孔或三孔，然后計(jì)算每個(gè)濃度標(biāo)準(zhǔn)品的平均OD值,，復(fù)孔的變異系數(shù)應(yīng)該小于20%,。
②：平均OD值減去空白孔的OD值。
③：制作標(biāo)準(zhǔn)曲線,。
以減去本底后的OD值為X軸,，標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為Y軸，利用作圖軟件得出一個(gè)合適的計(jì)算方法,。建議使用合適的軟件來(lái)作圖,，比如CurveExpert 1.4,。這款軟件能夠給出很多種方法(比如直線,、半對(duì)數(shù)、對(duì)數(shù),、四參數(shù)方程等)并從中選擇一條zui合適的方程,。要想檢驗(yàn)?zāi)硹l曲線是否與表中數(shù)據(jù)吻合，可以將標(biāo)準(zhǔn)品的濃度作為未知數(shù),，將對(duì)應(yīng)的OD值帶入該方程,，計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)品的濃度，得到的結(jié)果應(yīng)該與實(shí)際濃度很接近(+/-10%),。選擇擬合度zui高的那條曲線,。
如果出現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性不好，或平行性不好(雙孔對(duì)照孔的OD值差別很大),，或出現(xiàn)跳孔的現(xiàn)象,，可能引起的原因有酶標(biāo)板孔間相互污染、洗板后未能盡快進(jìn)行下一步操作,、添加樣品或其它試劑時(shí)操作的方法不對(duì),、孵育位置避光性不佳或蓋板膜沒(méi)有密封好使得水分蒸發(fā)、酶標(biāo)板孔問(wèn)加入的試劑量不同,，相對(duì)應(yīng)的解決辦法是加樣時(shí)請(qǐng)小心勿將液體濺人另一孔中,，人工洗板時(shí)也請(qǐng)小心,，勿將洗滌液濺人另一微孔中、在洗板后及時(shí)進(jìn)行下一步操作,、添加試劑時(shí)請(qǐng)懸空滴入,，切記勿將槍頭接觸到板孔內(nèi)，吸取不同試劑瓶中的液體時(shí)就要更換一次槍頭,、確認(rèn)孵育環(huán)境不透光,，蓋板膜將酶標(biāo)板密封好、使用已校正過(guò)的微量加樣器,，如將*次加入液體時(shí)槍頭上留有一滴的液體滴下,，那么將以后槍頭上留有的液體也滴下，以保證加入液體體積的一致性,。
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