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掌握兩點抗體選擇不再是難題
閱讀：1251 發(fā)布時間：2015-8-7不同的實驗使用的抗體也大為不同,，根據(jù)試驗應用的類型,、樣本蛋白的結(jié)構(gòu)性質(zhì)、樣本的種屬,、抗體宿主的種類以及抗體的標記和檢測具體情況選擇zui符合實驗實際操作情況的單抗和二抗,。恒遠總結(jié)一下兩點供廣大科研愛好者參考。
(一)動物的選擇
目前應用zui廣的是小白鼠和大白鼠，尤以小白鼠為好,。就品系而言以Balb/c小白鼠應用zui廣,，因為所有的小白鼠骨髓瘤系均從Balb/c小白鼠系誘導出來。Balb/c系小白鼠必須用純系的,，雌雄均可,，以8~12周齡為宜。
大白鼠也可,，能產(chǎn)生較多量的單克隆抗體?，F(xiàn)在已經(jīng)在小鼠雜交瘤的基礎(chǔ)上，發(fā)展了小鼠-大鼠,，小鼠-人以及人-人雜交瘤技術(shù),。
(二)免疫
一般而言，抗原的純度不很重要,，特別是免疫原性較強的抗原,。
免疫程序、劑量和方法是關(guān)系到是否能得到所需要的單克隆抗體的關(guān)鍵之一,。
正常小鼠脾臟含有能產(chǎn)生各種不同抗體的b淋巴細胞,，一只純種小白鼠估計能產(chǎn)生1.0×107~5.0×107種不同的抗體。因此一只正常的小白鼠的脾細胞與小鼠骨髓瘤融合,，只能有千萬分之一的機會獲得某一種特定抗體,。所以為了提高得到某種雜交瘤的機會，必須加強免疫,，使產(chǎn)生特異性抗體的B淋巴細胞大量增加,。
B淋巴細胞的不同發(fā)育階段對獲得陽性雜交瘤也有很大影響。有人認為處在轉(zhuǎn)化時期的B淋巴細胞可能更易于融合,，而免疫以后7~8天,，雖然是抗體產(chǎn)生的高峰時期，但形成有活力的雜交瘤細胞的可能反而減少,。故一般認為加強免疫后的第三天應殺鼠取脾做細胞融合,。
1.可溶性抗原(蛋白質(zhì)) 以1mg/ml～5mg/ml的溶液加等量的弗氏*佐劑乳化，分多點小鼠皮下注射,，總量為0.3ml～0.6ml,，間隔3～5周再同樣注射一次，10天后,，斷尾取血一滴,，測抗體效價，選滴度高的小鼠做融合試驗,。一個月后可以經(jīng)靜脈(尾靜脈)給予無佐劑抗原0.2ml～0.4ml,，3～4天后,，殺死小鼠取脾做融合用,。
2.顆粒性抗原 如抗原來源方便,，可以不加佐劑而增加免疫次數(shù)，縮短間隔時間,。例如用羊紅血球免疫小白鼠,，以1%濃度每只皮下注射0.2ml，每周2次,，共免疫5～8次,，取脾前3天，再免疫一次即可,。