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在同一條件下做WB實(shí)驗(yàn)為什么一張膜顯影,，一張膜未顯影,？
閱讀：5957 發(fā)布時(shí)間：2014-9-1近期恒遠(yuǎn)經(jīng)常接到客戶的：同一條件下,，除了測(cè)的指標(biāo)不一樣,，為什么有張膜顯影，有張未顯影,？,？？
上海恒遠(yuǎn)技術(shù)分析：在同一條件下,，如果一張膜顯影,，一張膜未顯影，可以逐一查找原因：
1,、你是否兩張膜上都設(shè)有陽(yáng)性對(duì)照,？如果有，一張膜有信號(hào),，一張沒(méi)信號(hào),，可能是操作過(guò)程中有問(wèn)題（可能原因是（1）、你結(jié)合底物會(huì)不會(huì)有問(wèn)題,，即沒(méi)有充分結(jié)合好,，或者結(jié)合時(shí)間太短，（2）,、你要確定兩張膜都是用新的底物反應(yīng)液,，（3）、就是沒(méi)有信號(hào)的膜會(huì)不會(huì)壓片時(shí)間太短,，如果使用儀器掃片就不存在這種問(wèn)題,，）所以原因比較多，你只能逐一排查,。
2,、如果沒(méi)有設(shè)對(duì)照，這個(gè)問(wèn)題就更復(fù)雜,，而且解決起來(lái)也不科學(xué),。同時(shí)，要控制兩個(gè)膜條件*一樣是很困難的,。即使你是同時(shí)做的兩個(gè),，那一定有一個(gè)先上樣，一個(gè)后上樣,，而且你跑膠的時(shí)候會(huì)發(fā)現(xiàn),，兩塊膠上的條帶速度肯定是不一樣的，轉(zhuǎn)膜兩個(gè)膜放的位置也肯定不一樣,，等等,，也許這些小問(wèn)題都不能導(dǎo)致你壓片不出條帶，我只是想說(shuō),，兩個(gè)條件不可能*相同,，western blot實(shí)驗(yàn)就是重復(fù)性比較差，所以一個(gè)出一個(gè)不出,，這樣是正常的,。