日韩av大片在线观看欧美成人不卡|午夜先锋看片|中国女人18毛片水多|免费xx高潮喷水|国产大片美女av|丰满老熟妇好大bbbbbbbbbbb|人妻上司四区|japanese人妻少妇乱中文|少妇做爰喷水高潮受不了|美女人妻被颜射的视频,亚洲国产精品久久艾草一,俄罗斯6一一11萝裸体自慰,午夜三级理论在线观看无码

       ELISA實驗成功的前提是樣本的正確處理加上實驗途中正確的操作,，正確的處理樣本是保證ELISA檢測的正確性和準確性的*步,。通常我們可用于ELISA檢測的樣本是有多種類型的,，如血清,、血漿,、尿液、細胞培養(yǎng)上清或組織勻漿液等,，不同類型的檢測樣本前期的處理方法是不一樣的,。正確的處理樣本是保證ELISA檢測的正確性和準確性的*步，下面就由上海恒遠為您簡單介紹一下不同類型的樣本的處理方法,。

1,、  血清

血清是zui常用于ELISA檢測的一類樣本，處理也比較簡單,。

用無熱原,、無內(nèi)毒素的試管或離心管采集血液標本，將試管或離心管室溫放置2小時或4℃放置一晚，使血清析出,。（將試管或離心管傾斜放置,，使液面橫截面增大，能使血清更大程度的析出,。）4℃ 1000×g離心20分鐘,，仔細收集上清。建議將血清分裝多份,，-20℃或-80℃保存,，避免反復(fù)凍融。

采血過程中應(yīng)避免溶血,，因為紅細胞裂解時會釋放具有過氧化酶活性的物質(zhì),，在以HRP為標記的ELISA檢測中會有非特異性的顯色，而導(dǎo)致檢測的不準確性,。同時也應(yīng)避免細菌污染,，因為菌體內(nèi)可能含有內(nèi)源性的HRP從而導(dǎo)致檢測的假陽性。

2,、  血漿

用含抗凝劑的采血管或離心管采集血液標本,，標本采集后30min內(nèi)4℃ 1000×g離心15min，取上清即血漿,。將上清分裝多份,，-20℃或-80℃保存，避免反復(fù)凍融,。避免使用溶血或高血脂的標本。

常用的抗凝劑為EDTA,、肝素鈉和枸櫞酸鈉等,，檢測時還應(yīng)仔細閱讀試劑盒說明書，檢查試劑盒是否對抗凝劑有特殊要求,。

3,、  細胞培養(yǎng)上清

取細胞培養(yǎng)上清到離心管，1000×g離心20min,，除去細胞碎片及雜質(zhì),，取上清，-20℃或-80℃保存,，避免反復(fù)凍融,。

4、  細胞裂解液

1）  吸去培養(yǎng)板內(nèi)的培養(yǎng)基,，用胰酶消化細胞,，加適量培養(yǎng)基將細胞從培養(yǎng)板上吹下來。懸浮細胞可省略。

2）  收集細胞懸液,，1000×g離心10min,，棄去培養(yǎng)基，用預(yù)冷的PBS潤洗3次,。

3）  加入適量的預(yù)冷PBS或細胞裂解液（臨用前加入蛋白酶抑制劑）重懸細胞,。通常6孔板一個孔的細胞量需要150~250μL PBS重懸。

4）  將樣品放入-20℃或-80℃,，使樣品冷凍,，再放室溫解凍樣品，反復(fù)凍融幾次,，使細胞充分裂解,。也可將樣品進行超聲破碎，以達到裂解的目的,。

5）  4℃ 10000×g 離心10min,，除去細胞碎片，取上清,，-20℃或-80℃保存,，避免反復(fù)凍融。

5,、組織勻漿液

1）  將組織樣本用PBS (0.01M, PH 7.4) 沖洗,，洗去組織表面殘留的血液或雜質(zhì)。

2）  將組織塊稱重,，記錄后剪碎,，碎塊應(yīng)盡量小，便于勻漿得更充分

3）  將組織按一定的比例加入預(yù)冷的PBS（臨用前加入蛋白酶抑制劑）勻漿,，勻漿時置于冰上或冰浴中,。（通常按組織重量：PBS體積=1:9的比例勻漿，例如1g的組織樣本對應(yīng)9mL的PBS,，具體體積可根據(jù)實驗需要適當調(diào)整,，檢測后計算樣品濃度時應(yīng)乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)）

4）  吸取勻漿液到離心管，4℃ 5000×g 離心5~10min,，取上清,，-20℃或-80℃保存，避免反復(fù)凍融,。

6,、  尿液、唾液等其他液體生物樣本

1000×g離心20min,，取上清即可檢測,。

總的來說，因為ELISA只能檢測可溶性蛋白的含量，所以應(yīng)保證所有樣本均為澄清的液體,，沉淀或懸浮物都應(yīng)離心去除,。

為了保證檢測的準確性，保存于-20℃或-80℃的樣本在1~6個月內(nèi)檢測,；4℃保存的樣本應(yīng)在1周內(nèi)進行檢測,。

另外，還應(yīng)保證樣本不含NaN₃,，因為NaN₃會抑制HRP的活性,，從而導(dǎo)致假陰性的結(jié)果。