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自身免疫試劑盒的具體注意事項
閱讀:1695 發(fā)布時間:2013-9-2自身免疫試劑盒原理:
當(dāng)細(xì)胞在非變性條件下被裂解時,,完整細(xì)胞內(nèi)存在的許多蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)間的相互作用被保留了下來,。如果用蛋白質(zhì)x的抗體免疫沉淀x,,那么與x在體內(nèi)結(jié)合的蛋白質(zhì)y也能沉淀下來。這種方法常用于測定兩種目標(biāo)蛋白質(zhì)是否在體內(nèi)結(jié)合,;也可用于確定一種特定蛋白質(zhì)的新的作用搭檔,。
自身免疫試劑盒注意的問題:
(1)細(xì)胞裂解采用溫和的裂解條件,不能破壞細(xì)胞內(nèi)存在的所有蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用,,多采用非離子變性劑(NP40或Triton X-100),。每種細(xì)胞的裂解條件是不一樣的,通過經(jīng)驗確定,。不能用高濃度的變性劑(0.2%SDS),,細(xì)胞裂解液中要加各種酶抑制劑。
(2)使用明確的抗體,,可以將幾種抗體共同使用,。
(3)使用對照抗體:
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