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處理細胞培養(yǎng)中的支原體污染
閱讀：2651 發(fā)布時間：2013-4-8支原體是目前已知一類能在無生命培養(yǎng)基上生長繁殖的zui小的原核細胞型微生物。自然界分布廣泛,，種類多，有80余種,，分為兩個屬：一為支原體屬（Mycoplasma）,，有幾十個種；另一為脲原體屬（Ureaplasma）,，僅有一種,。與人類感染有關(guān)的主要是肺炎支原體和解脲脲原體。
支原體無細胞壁,，多呈不規(guī)則球狀,、長絲狀，可分枝,，營寄生共生或腐生,。一般侵害對象為動植物，可造成多種疾病,。
細胞培養(yǎng)（特別是傳代細胞）被支原體污染是個世界性問題,。國內(nèi)外研究表明，95%以上是以下四種支原體：口腔支原體（M.orale）,、精氨酸支原體（M.arginini）,、豬鼻支原體（M.hyorhinis）和菜氏無膽甾原體（A.laidlawii），為牛源性,。國外調(diào)查證明,，大約有二十多種支原體能污染細胞，有的細胞株可以同時污染兩種以上的支原體,。
支原體污染的來源包括工作環(huán)境的污染,、操作者本身的污染（某些支原體在人體是正常菌群）、培養(yǎng)基的污染,、被污染細胞造成的交叉污染,、實驗器材的污染、制備細胞的原始組織或器官的污染,，等等,。
體外生長的細胞對微生物及一些有害有毒物質(zhì)沒有抵抗能力，因此培養(yǎng)基應(yīng)達到無化學(xué)物質(zhì)污染,、無微生物污染（如細菌,、真菌、支原體,、病毒等）,、無其他對細胞產(chǎn)生損傷作用的生物活性物質(zhì)污染（如抗體,、補體）。對于天然培養(yǎng)基,，污染主要來源于取材過程及生物材料本身,，應(yīng)當嚴格選材，嚴格操作,。對于合成培養(yǎng)基,，污染主要來源于配制過程，配制所用的水,，器皿應(yīng)十分潔凈,，配制后應(yīng)嚴格過濾除菌。
由于體外培養(yǎng)細胞自身沒有抵抗污染的能力,，而且培養(yǎng)基中的抗生素抗污染能力有限,，因而培養(yǎng)細胞一旦發(fā)生污染多數(shù)將無法挽回。支原體污染后,，因為它們不會使細胞死亡可以與細胞長期共存,，培養(yǎng)基一般不發(fā)生渾濁，細胞無明顯變化,，外觀上給人以正常感覺,，實則細胞手到多方面潛在影響，如引起細胞變形,，影響DNA合成,，抑制細胞生長等。
組織細胞培養(yǎng)工作中,，可以從以下幾方面來預(yù)防支原體的污染：控制環(huán)境污染,；嚴格實驗操作；細胞培養(yǎng)基和器材要保證無菌,；在細胞培養(yǎng)基沖加入適量的抗生素,。
抗生素主要用于消毒培養(yǎng)液，是培養(yǎng)過程中預(yù)防微生物污染的重要手段,，也是微生物污染不嚴重時的“急救”方法,。不同抗生素殺滅微生物不同，應(yīng)根據(jù)需要選擇,。
在細胞培養(yǎng)過程中如果發(fā)現(xiàn)破碎的細胞甚多,，培養(yǎng)細胞需要頻繁改善營養(yǎng)環(huán)境才能支持長期傳代培養(yǎng)時，應(yīng)該懷疑支原體污染,。支原體污染難以觀察特殊的外觀變化,，培養(yǎng)液也不渾濁。
支原體污染細胞后,，特別是重要的細胞株,，有必要清除支原體,，常用方法有：抗生素處理、抗血清處理,、抗生素加抗血清和補體聯(lián)合處理,。要注意的是：支原體沒有細胞壁，故作用于細胞壁生物合成的抗生素,，如內(nèi)酰胺類,、萬古霉素等是不敏感的；對多粘菌素,、利福平、磺胺藥物普遍耐,。對支原體zui有抑制活性抗生素是四環(huán)素類,、大環(huán)內(nèi)酯類等，氨基糖苷類,、氯霉素對支原體有較小的抑制作用,。必要時更換所有培養(yǎng)用物。通常,，濾過除菌的方法對支原體是沒有作用的,。
由于一些微生物，如支原體,，病毒等能通過濾膜,，所以過濾藥品仍潛在被外源微生物污染的危險，近年來,，60Co輻射滅菌技術(shù)在醫(yī)藥,、食品等領(lǐng)域廣泛應(yīng)用，由于輻射滅菌能夠*殺滅所有微生物,。有試驗證實以2Mrad輻射處理的各培養(yǎng)基樣品達到了無菌要求,，經(jīng)多批培養(yǎng)試驗，輻射滅菌安全可靠,；輻射滅菌的培養(yǎng)基營養(yǎng)性能不低于過濾組,，證明輻射滅菌對培養(yǎng)基性能無不良影響；對血清的輻射滅菌試驗效果也表明60COγ射線不影響培養(yǎng)效果,。把干粉培養(yǎng)基經(jīng)無菌操做定量分裝于滅菌容器內(nèi),，輻射后以干粉原型貯藏，不但培養(yǎng)基的純凈性得到保障,，而且營養(yǎng)性能較過濾后以水溶液形式保存更穩(wěn)定,，對谷氨酰胺等這類水溶液不穩(wěn)定者特別合適。