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上海恒遠(yuǎn)告訴大家：關(guān)于白介素4的不同檢測(cè)方法
閱讀：2836 發(fā)布時(shí)間：2012-8-14
1,、IL-4與LPS共刺激B細(xì)胞分泌IgG1和IgE的測(cè)定小鼠B淋巴細(xì)胞在LPS刺激下首先分泌IgM和IgG3、IgG2b,。當(dāng)IL-4作用于LPS刺激的B細(xì)胞時(shí),，IgM、ISC3,、IgG2b合成產(chǎn)物明顯減少,，而IgE,、IgCl合成產(chǎn)物顯著地增加。在細(xì)胞培養(yǎng)5-6d后,，收獲上清,，通過對(duì)IgE和IgCl測(cè)定，間接了解IL-4的含量,。IgE測(cè)定用放射免疫法,；IgCl含量測(cè)定可采用雙抗體ELISA夾心法。
2,、依賴株CT．4S的增殖試驗(yàn) CT．4S細(xì)胞是依賴于IL-4,，對(duì)IL-2低反應(yīng)的CTLL變異株，其增殖反應(yīng)（用3H-TdR摻人量來反映）與IL-4呈劑量相關(guān),。操作步驟基本同前述用CTLL-2測(cè)IL-2,，但應(yīng)設(shè)置rIL-2對(duì)照，以進(jìn)一步排除IL-2對(duì)結(jié)果的影響,。
CT．4S細(xì)胞是一類粘附細(xì)胞,，在收獲細(xì)胞時(shí)，可先用0．25％胰酶消化,。CT．4S細(xì)胞雖是IL4依賴株,，但待測(cè)樣品中IL-2含量過高（>100U／mL）或IL4含量過高，均影響IL-4測(cè)定,。因此在進(jìn)行大批試驗(yàn)時(shí),，對(duì)待測(cè)樣品應(yīng)進(jìn)行預(yù)測(cè)，以便將樣品稀釋至該法zui敏感的檢測(cè)范圍之內(nèi),。
3,、轉(zhuǎn)染人IL-4受體的CTLL-2細(xì)胞測(cè)定人IL-4 由于IL-4的種屬特異性，人,、鼠之間沒有交叉反應(yīng),，故可將人IL-4受體基因轉(zhuǎn)染到IL-2依賴株CTLL-2細(xì)胞系中，使這種細(xì)胞同時(shí)表達(dá)小鼠IL-2受體和人IL-4受體,，因此,，可常規(guī)維持在含IL-2的培養(yǎng)基中，并可用于檢則重組人IL-4或封閉IL-2活性后的混合樣品中的人IL-4活性,。
4,、雙抗體夾心ELISA法檢測(cè)誘生上清IL-4含量 以免抗IL-4多克隆抗體包被反應(yīng)板，以酶標(biāo)抗IL-4McAb進(jìn)行夾心ELISA法,。與標(biāo)準(zhǔn)晶對(duì)比,，可測(cè)出誘生上清中的IL-4含量，操作步驟同常規(guī)ELISA,。
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