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一,、明確檢測目標?

1.檢測對象是什么？

明確待測物是細胞因子,、激素,、病毒抗體還是其他蛋白。不同試劑盒針對的抗原表位和抗體對可能不同,。

關鍵點：查看試劑盒說明書中的“檢測范圍"和“交叉反應",，確認是否覆蓋你的目標物種和異構(gòu)體（如人/小鼠/大鼠）。

2.需要定量還是定性,？

定量試劑盒需提供標準品和標準曲線,，適合精確測量濃度；定性試劑盒（如診斷用）通常只判斷陰陽性,。

二,、匹配樣本類型

不同樣本的處理方式可能影響檢測結(jié)果：

血清/血漿：需避免溶血、脂血（可能引起非特異性結(jié)合）,。

細胞培養(yǎng)上清：注意培養(yǎng)基中是否含高濃度BSA或胎牛血清（可能干擾檢測）,。

組織裂解液：需驗證裂解緩沖液成分是否與試劑盒兼容（如避免強去垢劑）。

提示：試劑盒說明書會標注已驗證的樣本類型，若使用特殊樣本（如腦脊液,、唾液）,，建議先做預實驗驗證,。

三,、選擇試劑盒類型

ELISA有四大常見類型，適用場景不同：

優(yōu)先選擇夾心法（靈敏度高,、特異性強）,，但小分子只能選競爭法。

四,、評估試劑盒性能

1.靈敏度與檢測限

靈敏度（最-低檢測濃度）和檢測范圍需覆蓋你的樣本濃度,。例如：檢測血清細胞因子時，若樣本濃度低,，需選擇高靈敏度試劑盒（如靈敏度≤1 pg/mL）,。

2.批間差與穩(wěn)定性

查看廠商是否提供不同批次的CV（變異系數(shù)）數(shù)據(jù)，批間差應<15%,。避免因批次差異導致實驗重復性差,。

3.抗體對來源

單克隆抗體特異性高但可能識別單一表位；多克隆抗體靈敏度高但需驗證交叉反應,。建議選擇經(jīng)Western Blot或質(zhì)譜驗證的抗體,。

五、驗證與優(yōu)化

陽性/陰性對照：試劑盒應提供明確對照,，用于判斷實驗有效性,。

回收率實驗：在樣本中加入已知濃度標準品，回收率應在80%-120%,。

重復性測試：同一樣本重復3次檢測,，CV值應<10%。

若背景信號過高,，可嘗試：縮短顯色時間,、優(yōu)化封閉液（如使用5%脫脂奶粉）、增加洗滌次數(shù),。