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常見細菌染色方法
閱讀：563 發(fā)布時間：2024-7-17
常見的染色方法包括簡單染色、負染色,、革蘭氏染色,、芽孢染色法,、鞭毛染色、莢膜染色,。制備細菌染色片一般要經(jīng)過涂片、固定,、染色、水洗,、干燥等步驟,，然后用顯微鏡甚至油鏡觀察,。
1. 簡單染色：
不同細菌或由于觀察者所側(cè)重觀察的內(nèi)容不同，所使用的染料也有差異，但簡單染色的方法是一樣的,。先按照上述的制片方法制片,，制成需要觀察的玻片后,，使用相對應(yīng)的染料滴加到玻片上的菌膜區(qū)域，以覆蓋菌膜為準,。按照不同染料的要求,，結(jié)合所觀察的內(nèi)容確定染色時間,，染色時間到達時進行水洗，干燥等步驟,。最后得到的玻片加蓋蓋玻片即可進行鏡檢,。如有需要可以后續(xù)再進行油封、蠟封等封片過程,。
2. 負染色：
制備觀察圖片是非常容易的，但對初學(xué)者來說想要在玻片中找到目標菌還是有一定難度的,，因為細菌常常無色透明且較小,，所以對初學(xué)者來說除非對光圈等進行很精細的調(diào)節(jié),，否則很難觀察到目標菌，因此進行負染色就十分重要,。該方法是將微生物與苯胺黑混合,，再將混合物覆蓋于載玻片表面,，由于這兩種天然黑色染料不能滲入微生物細胞，所以使得透明的微生物個體在黑色的背景下很容易觀察,。
負染色法常見有兩種操作方法,。
① 在一個載玻片上將微生物與異地苯胺黑混合，用另外的載玻片將混合物均勻的覆蓋于原來的載玻片上,。該方法的目的是使混合物在在玻片上一邊厚一邊薄,，在厚與薄中間的額區(qū)域就是最佳觀察區(qū)域,。
② 用一接種環(huán)苯胺黑與微生物混合，用接種針在載玻片的中央將混合物延伸很小的區(qū)域。
3. 革蘭氏染色：
革蘭氏染色是細菌學(xué)中廣泛使用的一種鑒別染色法,。細菌先經(jīng)堿性染料結(jié)晶紫染色,，而后經(jīng)碘液進行媒染，之后用酒精脫色,，在一定條件下有的細菌媒染后的顏色不會脫去，有的可以被脫去,，前者叫做革蘭氏陽性菌,，后者為革蘭氏陰性菌。為方便進一步觀察,，脫色后再用堿性蕃紅進行復(fù)染，陽性菌仍為紫色,，陰性菌染成紅色,，這就是革蘭氏染色的原理。
其步驟包括初染,、媒染、脫色,、復(fù)染四個步驟,。
4. 芽孢染色法：
部分細菌能產(chǎn)生內(nèi)孢子，這些孢子能抵制細菌染色液的進入,，在革蘭氏染色法涂片染色時,，革蘭氏陽性菌的芽孢呈現(xiàn)無色,。雖然芽孢在革蘭氏染色片中可以看到，但在不易清晰觀察時,，可用特殊的芽孢染色法,，使芽孢與菌體呈現(xiàn)不同顏色,，便于觀察。主要的芽孢染色法有孔雀綠染色法和石碳酸復(fù)紅染色法,。
5. 鞭毛染色法：
鞭毛是細菌的運動器官，非常纖細,，超出了光學(xué)顯微鏡觀察極限，因此通常情況在顯微鏡下觀察不到。通過特殊的染色技術(shù),，可以將染色液附加到鞭毛的周圍,，增加它的直徑，從而能在光學(xué)顯微鏡下觀察到鞭毛,。鞭毛染色一般分銀鹽法和復(fù)紅沉淀法兩種。
6. 莢膜染色：
一般細菌的莢膜與染色劑的親和性低,，但莢膜通透性高,，因此染料可透過莢膜使菌體著色,。一般采用負染色方法使背景和菌體之間形成一透明區(qū)，將菌體襯托出來便于觀察分辨,。
莢膜染色步驟：加一滴6%葡萄糖水溶液在載玻片的一端,，無菌操作,，挑取細菌斜面上培養(yǎng)72h左右的膠質(zhì)芽孢桿菌與其混合，加1滴墨汁充分混勻,，用推片法制片將菌液鋪成薄層,，自然干燥，滴加1-2滴無水乙醇覆蓋涂片,，固定1min，自然干燥,，在已晾干的涂面上,，滴加1%結(jié)晶紫染色液染色,，2min后用20%的硫酸銅沖洗數(shù)次，再用自來水沖洗一次,，使用擦鏡紙擦干后即可鏡檢,。有莢膜的菌菌體呈紫色，背景灰黑色,，莢膜不著色呈無色透明圈。
染色法在細菌的觀察,、分類,、鑒定中經(jīng)常用到,，因此是微生物檢測人員不-可或缺的基本技能之一,。
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