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鹽析法與抗體的分離純化
閱讀：598 發(fā)布時間：2024-5-28鹽析法原理
蛋白質(zhì)的溶解度在必定范圍內(nèi)隨鹽的濃度而改變。在低鹽濃度下溶解度跟著鹽濃度而添加,，當(dāng)鹽濃度到達(dá)必定水平常,，其溶解度又以不一樣程度降低并先后分出。其原理是因為蛋白質(zhì)分子的極性基團(tuán)有著靜電引力,，當(dāng)水中參加少數(shù)鹽類時,，鹽類離子與水分子對蛋白質(zhì)分子上極性基團(tuán)的影響，使蛋白質(zhì)在水中溶解度增大,。但鹽濃度添加到必定程度時，水的活度降低,，蛋白質(zhì)外表的電荷被中和,，水化膜損壞，致使蛋白質(zhì)分子互相集合而沉積,。鹽析法即是依據(jù)不一樣蛋白質(zhì)在必定濃度的鹽溶液中溶解度不一樣而到達(dá)互相別離的辦法,。
鹽的挑選
蛋白質(zhì)鹽析常用中性鹽，主要有硫酸銨,、硫酸鎂,、硫酸鈉、氯化鈉,、磷酸鈉等,。其間使用最-廣的是硫酸銨，其長處是溫度系數(shù)小,，溶解度大（25℃時飽滿溶解度為4.1mol/L,，即767g/L）。在不一樣的飽滿硫酸銨溶液范圍內(nèi),，不一樣蛋白質(zhì)依次分出,；并且硫酸銨價廉易得，分段效果好,，不簡單導(dǎo)致蛋白質(zhì)變性,。
硫酸銨濃溶液的pH常在4.5~5.5之間，市售的硫酸銨還常富含少數(shù)游離硫酸,，pH值通常在4.5以下,，須用氨水調(diào)節(jié)其pH值至7.0擺布。
鹽析須知
1,、鹽的飽滿度：鹽的飽滿度是影響蛋白質(zhì)鹽析的主要因素,，不一樣蛋白質(zhì)的鹽析請求鹽的飽滿度不一樣。別離幾個混合組分的蛋白質(zhì)時,，鹽的飽滿度常由低到高逐步添加,，每呈現(xiàn)一種蛋白質(zhì)沉積進(jìn)行離心別離后,，再繼續(xù)添加鹽的飽滿度，使第二種蛋白質(zhì)沉積,。如用硫酸鹽鹽析別離血漿蛋白,，當(dāng)飽滿度到達(dá)20%時，纖維蛋白原首先分出,；飽滿度增至28%~33%時,，優(yōu)球蛋白分出；飽滿度到達(dá)33%~50%時,，球蛋白分出,；飽滿度大于50%以上時，清蛋白分出,，免疫球蛋白常在飽滿度在33%開端分出,。
2、pH值：在等電點時,，蛋白質(zhì)溶解度最小,，簡單沉積分出。故鹽析時除個別特殊情況外,，pH值常挑選在被別離的蛋白質(zhì)等電點附近,。
3、蛋白質(zhì)濃度：在一樣鹽析條件下,，蛋白質(zhì)濃度越高越易沉積,，高濃度雖對沉積有利，但濃度過高,，也簡單導(dǎo)致別的蛋白的共沉積,，故有必要挑選恰當(dāng)濃度，盡可能避免共沉積效果的攪擾,。
4,、溫度：因為高濃度的鹽溶液對蛋白質(zhì)有必定保護(hù)效果，鹽析操作一般可在室溫下進(jìn)行,，但在使用某些中性鹽進(jìn)行鹽析時,，溫度對鹽溶解度的影響對比明顯。
5,、脫鹽：蛋白質(zhì)用鹽析沉積別離后,，常需求脫鹽才干獲得純品。最-常用的脫鹽辦法是透析,。通過透析袋表里的離子交換,，最后使透析袋內(nèi)溶液的鹽濃度與外界相一致。