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大分子抗原因其具有兩個(gè)以上的抗原決定簇,，而可用雙抗體夾心法測(cè)定,，小分子半抗原如di高辛、茶堿等藥物以及T3,，T4及睪酮等激素因其只有一個(gè)抗原決定簇,，從而無(wú)法使用雙抗夾心方法測(cè)定，只能采用競(jìng)爭(zhēng)抑制法測(cè)定,。具體步驟如下：

 

1．先用抗小分子的特異抗體如雙抗體夾心法一樣包被固相并封閉,。

 

2．同時(shí)加入待測(cè)樣本和酶標(biāo)的小分子，溫育一定時(shí)間后洗板,；此步中,，待測(cè)樣本的小分子將與酶標(biāo)小分子競(jìng)爭(zhēng)與固相上特異抗體結(jié)合。

 

3．加入酶底物,，溫育顯色測(cè)定,，顯色的強(qiáng)弱與待測(cè)樣本中的小分子含量成反比。

 

這種測(cè)定模式中,，需要得到小分子與酶的結(jié)合物,，而小分子酶結(jié)合物一則在制備上不如抗體酶結(jié)合物簡(jiǎn)便，二則其純化亦頗為困難,，結(jié)合有小分子的酶與游離酶之間難于分離,。因此，有人嘗試在合成二或多聚體小分子的基礎(chǔ)上,，建立雙抗夾心競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法測(cè)定小分子,，測(cè)定的靈敏度和特異性均有所提高.

 

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